Dovitinib (TKI258) Lactate monohydrate

Le Dovitinib inhibe puissamment la croissance stimulée par le FGF des cellules B9 exprimant WT et F384L-FGFR3 avec un IC50 de 25 nM. De plus, le Dovitinib inhibe la prolifération des cellules B9 exprimant chacune des diverses mutations activées de FGFR3. Il est intéressant de noter qu'il y a des différences minimes observées dans la sensibilité des différentes mutations de FGFR3 au Dovitinib, l'IC50 allant de 70 à 90 nM pour chacune des diverses mutations. Les cellules B9 dépendantes de l'IL-6 contenant uniquement le vecteur (cellules B9-MINV) sont résistantes à l'activité inhibitrice du Dovitinib à des concentrations allant jusqu'à 1 μM. Le Dovitinib inhibe la prolifération cellulaire des cellules KMS11 (FGFR3-Y373C), OPM2 (FGFR3-K650E) et KMS18 (FGFR3-G384D) avec un IC50 de 90 nM (KMS11 et OPM2) et 550 nM, respectivement. Le Dovitinib inhibe la phosphorylation d'ERK1/2 médiée par le FGF et induit une cytotoxicité dans les cellules MM primaires exprimant FGFR3. Les BMSC confèrent un degré modeste de résistance avec une inhibition de la croissance de 44,6 % pour les cellules traitées avec 500 nM de Dovitinib et cultivées sur stroma, comparativement à 71,6 % d'inhibition de la croissance pour les cellules cultivées sans BMSC. Le Dovitinib inhibe la prolifération de M-NFS-60, une lignée cellulaire myéloblastique murine à croissance dépendante du M-CSF, avec une concentration efficace médiane (EC50) de 220 nM. [1] Le traitement des cellules SK-HEP1 avec le Dovitinib entraîne une réduction dose-dépendante du nombre de cellules et un arrêt en phase G2/M avec une réduction des phases G0/G1 et S, une inhibition de la croissance indépendante de l'ancrage et un blocage de la motilité cellulaire induite par le bFGF. L'IC50 du Dovitinib dans les cellules SK-HEP1 est d'environ 1,7 μM. Le Dovitinib réduit également significativement les niveaux de phosphorylation basale de FGFR-1, du substrat 2α de FGFR (FRS2-α) et d'ERK1/2, mais pas d'Akt, dans les cellules SK-HEP1 et 21-0208. Dans les cellules HCC 21-0208, le Dovitinib inhibe significativement la phosphorylation induite par le bFGF de FGFR-1, FRS2-α, ERK1/2, mais pas d'Akt. [2]

Le Dovitinib induit des réponses à la fois cytostatiques et cytotoxiques in vivo, entraînant la régression des tumeurs exprimant FGFR3.[1] Le Dovitinib montre une inhibition dose- et exposition-dépendante des récepteurs tyrosine kinases (RTK) cibles exprimés dans les xénogreffes tumorales. Le Dovitinib inhibe puissamment la croissance tumorale de six lignées de CHC. L'inhibition de l'Angiogenesis est corrélée à l'inactivation des voies de signalisation FGFR/PDGFRβ/VEGFR2. Dans un modèle orthotopique, le Dovitinib inhibe puissamment la croissance tumorale primaire et les métastases pulmonaires et prolonge significativement la survie des souris. [2] L'administration de Dovitinib entraîne une inhibition significative de la croissance tumorale et des régressions tumorales, y compris des tumeurs volumineuses et établies (500-1 000 mm³). [3]

• Essais de kinase in vitro

  Les valeurs de concentration inhibitrice de 50 % (IC50) pour l'inhibition des RTK par le Dovitinib sont déterminées dans un format de fluorescence résolue dans le temps (TRF) ou radioactif, mesurant l'inhibition par le Dovitinib du transfert de phosphate à un substrat par l'enzyme respective. Les domaines kinase de FGFR3, FGFR1, PDGFRβ et VEGFR1-3 sont testés dans 50 mM HEPES (acide N-2-hydroxyéthylpipérazine-N^'-2-éthanesulfonique), pH 7,0, 2 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM NaF, 1 mM dithiothréitol (DTT), 1 mg/mL d'albumine sérique bovine (BSA), 0,25 μM de substrat peptidique biotinylé (GGGGQDGKDYIVLPI) et 1 à 30 μM d'adénosine triphosphate (ATP) en fonction du K_m de l'enzyme respective. Les concentrations d'ATP sont égales ou juste inférieures au K_m. Pour les réactions de c-KIT et FLT3, le pH est augmenté à 7,5 avec 0,2 à 8 μM d'ATP en présence de 0,25 à 1 μM de substrat peptidique biotinylé (GGLFDDPSYVNVQNL). Les réactions sont incubées à température ambiante pendant 1 à 4 heures et le peptide phosphorylé est capturé sur des microplaques revêtues de streptavidine contenant un tampon d'arrêt de réaction (25 mM EDTA [acide éthylènediaminetétraacétique], 50 mM HEPES, pH 7,5). Le peptide phosphorylé est mesuré avec le système DELFIA TRF en utilisant un anticorps anti-phosphotyrosine PT66 marqué à l'Europium. La concentration de Dovitinib pour l'IC50 est calculée par régression non linéaire avec le logiciel d'analyse de données XL-Fit version 4.1 (IDBS). L'inhibition de l'activité kinase du récepteur du facteur stimulant les colonies-1 (CSF-1R), de PDGFRα, du récepteur de l'insuline (InsR) et du récepteur du facteur de croissance de type insulinique 1 (IGFR1) est déterminée à des concentrations d'ATP proches du K_m de l'ATP.

• Lignées cellulaires

  B9 cells, MM cell lines

• Concentrations

  100 nM

• Temps dincubation

  48-96 hours

• Méthode

  Cell viability is assessed by 3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyl tetrazolium (MTT) dye absorbance. Cells are seeded in 96-well plates at a density of 5 × 10³ (B9 cells) or 2 × 10⁴ (MM cell lines) cells per well. Cells are incubated with 30 ng/mL aFGF and 100 μg/mL heparin or 1% IL-6 where indicated and increasing concentrations of Dovitinib. For each concentration of Dovitinib, 10 μL aliquots of drug or DMSO diluted in culture medium is added. For drug combination studies, cells are incubated with 0.5 μM dexamethasone, 100 nM Dovitinib, or both simultaneously where indicated. To evaluate the effect of Dovitinib on growth of MM cells adherent to BMSCs, 10⁴ KMS11 cells are cultured on BMSC-coated 96-well plates in the presence or absence of Dovitinib. Plates are incubated for 48 to 96 hours. For assessment of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF)-mediated growth, 5 × 10³ M-NFS-60 cells/well are incubated with serial dilutions of Dovitinib with 10 ng/mL M-CSF and without granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF). After 72 hours cell viability is determined using Cell Titer-Glo Assay. Each experimental condition is performed in triplicate.

• Modèles animaux

  8-week-old female BNX mice bearing KMS11 cells

• Posologies

  10, 30, or 60 mg/kg

• Administration

  p.o.