|
Comment citer 1. Pour la citation dans le texte (Matériel & Méthodes) : 2. Pour le tableau des ressources clés : |
||
|
Numéro vert : (877) 796-6397 -- États-Unis et Canada uniquement -- |
Fax : +1-832-582-8590 Commandes : +1-832-582-8158 |
Support technique : +1-832-582-8158 Ext:3 Veuillez indiquer votre numéro de commande dans le-mail. Nous nous efforçons de répondre à toutes les demandes par e-mail dans un délai dun jour ouvrable. |
Description biologique
| Spécificité | E.coli LPS Antibody [M15H2] détecte spécifiquement E.coli LPS. |
|---|---|
| Contexte | Le LPS (Lipopolysaccharide) d'E. coli constitue le composant structural primaire et la puissante endotoxine de la membrane externe bactérienne à Gram négatif, comprenant le Lipide A, l'oligosaccharide central et l'antigène O qui maintiennent collectivement l'intégrité de la membrane tout en servant de molécule immunostimulante la plus puissante connue. Le Lipide A s'ancre sous la forme d'un disaccharide de β-1',6-glucosamine bis-phosphorylé, acylé avec six chaînes d'acides gras, formant la portion toxique reconnue par le complexe récepteur TLR4-MD-2-CD14 de l'hôte, tandis que la région centrale est liée via des sucres Kdo-heptose portant des groupes phosphate/éthanolamine chargés pour la stabilisation de la membrane, et la chaîne polysaccharidique d'antigène O hautement variable d'épitopes répétés confère une spécificité de sérotype et une évasion immunitaire par phagocytose/résistance au complément créant une morphologie bactérienne "lisse". Le LPS forme une barrière de perméabilité essentielle protégeant contre les sels biliaires, les antibiotiques et les peptides cationiques tout en déclenchant une activation immunitaire innée catastrophique via les voies NF-κB et IRF3 dépendantes de MyD88/TRIF, entraînant des tempêtes cytokiniques massives de TNF-α, IL-1β, IL-6 qui précipitent le choc septique, la coagulation intravasculaire disséminée et la défaillance multi-organique lors de bactériémie à Gram négatif ; une endotoxémie chronique de faible grade due à la translocation intestinale contribue à l'athérosclérose, aux maladies neurodégénératives et au syndrome métabolique via une inflammation vasculaire soutenue, positionnant le LPS comme un élément structural bactérien indispensable et le toxine microbienne la plus dangereuse pour l'humanité. |
Informations dutilisation
| Application | IF, ELISA | Dilution |
|
||
|---|---|---|---|---|---|
| Réactivité | Escherichia coli | ||||
| Source | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||
| Tampon de stockage | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Stockage (À partir de la date de réception) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IF |
Experimental Protocol:
Sample Preparation
1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.
2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.
3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.
4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.
Fixation
1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.
2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Permeabilization
1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.
(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)
Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Blocking
Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)
Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.
Immunofluorescence Staining (Day 1)
1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.
2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.
Immunofluorescence Staining (Day 2)
1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.
3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.
5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
Mounting
1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.
2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.
3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.
|
Références
|