GNF-2

N° de catalogueS2899 Lot :S289902

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Données techniques

Formule

C₁₈H₁₃F₃N₄O₂

Poids moléculaire

374.32

Numéro CAS

778270-11-4

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

74 mg/mL (197.69 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

GNF-2 est un inhibiteur non compétitif de l'ATP, hautement sélectif de Bcr-Abl, ne montrant aucune activité envers les cellules tumorales transformées par Flt3-ITD, Tel-PDGFR, TPR-MET et Tel-JAK1.

Cibles

Bcr-Abl (SUP-B15 cell line)	Bcr-Abl (K562 cell line)
268 nM	273 nM

In vitro

Le GNF-2 provoque une inhibition de la croissance dose-dépendante des lignées cellulaires positives pour Bcr-abl avec des valeurs d'IC50 de 273 nM (K562) et 268 nM (SUP-B15). Ce composé inhibe la croissance des cellules Ba/F3.p210^E255V et Ba/F3.p185^Y253H avec des valeurs d'IC50 de 268 nM et 194 nM respectivement. Ce produit chimique (1 μM) induit l'apoptose des cellules Ba/F3.p210 ainsi que des cellules Ba/F3.p210^E255V. Il inhibe la phosphorylation cellulaire de la tyrosine de Bcr-abl de manière dose-dépendante avec une IC50 de 267 nM. Ce composé (1 μM) induit une diminution significative des niveaux de phospho-Stat5 dans les cellules Ba/F3.p210. Il se lie à la poche de liaison myristique de Bcr-abl. Cet inhibiteur inhibe l'activité kinase du c-Abl non myristoylé plus puissamment que celle du c-Abl myristoylé en se liant à la poche de liaison au myristate dans le lobe C du domaine kinase. Cet agent (10 μM) nécessite les domaines BCR et/ou c-Abl SH3 et/ou SH2 pour inhiber la prolifération cellulaire dépendante de BCR-Abl. Il se lie, mais pas un analogue GNF-2 méthylé, au c-Abl dans des extraits cellulaires dérivés de fibroblastes 3T3. Ce composé (10 μM), de manière dose-dépendante, inhibe clairement la phosphorylation de la tyrosine de CrkII. Il inhibe la phosphorylation de CrkII dans les cellules exprimant c-AblG2A avec une IC50 de 0,051 μM. Cette substance chimique se lie dans une conformation étendue dans la poche myristate, le groupe CF3 étant enfoui à la même profondeur que les deux derniers carbones du ligand myristate. Ce composé (10 µM) combiné à l'imatinib (1 µM) réduit le nombre de clones résistants à 1 µM d'imatinib d'au moins 90 %. Il inhibe l'autophosphorylation et la prolifération des cellules BafF3 exprimant les mutants p210Bcr-Abl et p210Bcr-Abl. Cet agent (8 nM) en combinaison avec GNF-5 (20 nM) entraîne des effets additifs en ce qui concerne l'inhibition de l'activité kinase Abl64-515.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[2]}	Test de liaison Les protéines recombinantes (100 nM pour chaque construction) ou les protéines immunoprécipitées sont diluées dans un tampon de kinase (20 mM HEPES (pH 7,4), 50 mM KCl, 0,1 % CHAPS, 30 mM MgCl₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM DTT et 1 % de glycérol). Des aliquotes des protéines diluées sont pré-incubées avec du DMSO ou ce composé pendant 30 min à température ambiante, puis ajoutées aux plaques de réaction K-LISA PTK EAY. La réaction de la kinase est initiée par l'ajout de 0,1 mM d'ATP et est laissée à se dérouler pendant 30 min à température ambiante. La phosphorylation de la GST-Abltide est surveillée par SDS-PAGE et analyse par phosphorimagerie ou autoradiographie.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires Ba/F3.p210, Ba/F3.p210^E255V and Ba/F3.p185^Y253H cells Concentrations ~10 μM Temps dincubation 48 hours Méthode Cells (0.3-0.6 × 10⁶ per mL) are plated in duplicate or triplicate in 96-well plates containing increasing GNF-2 concentrations (5 nM–10 μM). After incubation at 37 ℃ in 5% CO₂ for 48 hours, the effect of this compound on cell viability is determined by the MTT colorimetric dye reduction method. Inhibition of cell proliferation is calculated as a percentage of growth of DMSO-treated cells, and IC50 values are determined with Microsoft Excel XLfit3.

Test kinase :^{^[2]}

Test de liaison
Les protéines recombinantes (100 nM pour chaque construction) ou les protéines immunoprécipitées sont diluées dans un tampon de kinase (20 mM HEPES (pH 7,4), 50 mM KCl, 0,1 % CHAPS, 30 mM MgCl₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM DTT et 1 % de glycérol). Des aliquotes des protéines diluées sont pré-incubées avec du DMSO ou ce composé pendant 30 min à température ambiante, puis ajoutées aux plaques de réaction K-LISA PTK EAY. La réaction de la kinase est initiée par l'ajout de 0,1 mM d'ATP et est laissée à se dérouler pendant 30 min à température ambiante. La phosphorylation de la GST-Abltide est surveillée par SDS-PAGE et analyse par phosphorimagerie ou autoradiographie.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
Ba/F3.p210, Ba/F3.p210^E255V and Ba/F3.p185^Y253H cells
Concentrations
~10 μM
Temps dincubation
48 hours
Méthode
Cells (0.3-0.6 × 10⁶ per mL) are plated in duplicate or triplicate in 96-well plates containing increasing GNF-2 concentrations (5 nM–10 μM). After incubation at 37 ℃ in 5% CO₂ for 48 hours, the effect of this compound on cell viability is determined by the MTT colorimetric dye reduction method. Inhibition of cell proliferation is calculated as a percentage of growth of DMSO-treated cells, and IC50 values are determined with Microsoft Excel XLfit3.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16415863/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19679652/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20072125/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20152788/

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Validation du produit par le client

: Données de [ , , Oncotarget, 2017, 8(24):38717-38730 ]

Sellecks GNF-2 A été cité par 8 Publications

A multiplexed siRNA screen identifies key kinase signaling networks of brain glia [ Life Sci Alliance, 2023, 6(5)e202201605]	PubMed: 36878638
Imatinib protects against human beta-cell death via inhibition of mitochondrial respiration and activation of AMPK [ Clin Sci (Lond), 2021, 135(19):2243-2263]	PubMed: 34569605
Quantitative, Wide-Spectrum Kinase Profiling in Live Cells for Assessing the Effect of Cellular ATP on Target Engagement [Vasta JD Cell Chem Biol, 2018, 25(2):206-214]	PubMed: 29174542
Abl and Arg mediate cysteine cathepsin secretion to facilitate melanoma invasion and metastasis [ Sci Signal, 2018, 11(518)eaao0422]	PubMed: 29463776
Coronavirus S protein-induced fusion is blocked prior to hemifusion by Abl kinase inhibitors. [ J Gen Virol, 2018, 99(5):619-630]	PubMed: 29557770
Comparative Characterization of Osteoclasts Derived From Murine Bone Marrow Macrophages and RAW 264.7 Cells Using Quantitative Proteomics. [ JBMR Plus, 2018, 2(6):328-340]	PubMed: 30460336
Abl kinase regulation by BRAF/ERK and cooperation with Akt in melanoma. [ Oncogene, 2017, 36(32):4585-4596]	PubMed: 28368422
Contributions of MET activation to BCR-ABL1 tyrosine kinase inhibitor resistance in chronic myeloid leukemia cells. [Tsubaki M, et al. Oncotarget, 2017, 8(24):38717-38730]	PubMed: 28418880

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