GSK2334470

GSK2334470 inhibe PDK1 d'activer l'Akt1 pleine longueur en présence de vésicules lipidiques contenant du PtdIns(3,4,5)P₃ ou un mutant d'Akt1 dépourvu du domaine PH (ΔPH-Akt1) avec une IC50 d'environ 10 nM. Ce composé inhibe également de manière similaire PDK1 de phosphoryler le substrat peptidique PDKtide avec une IC50 d'environ 10 nM. Il (0,1 μM–0,3 μM) induit une inhibition significative dose-dépendante de NDRG1 endogène avec une réduction de plus de 50 % de la phosphorylation dans les cellules HEK-293. Ce produit chimique (30 nM) induit une inhibition dose-dépendante significative de la phosphorylation de la boucle T de chaque isoforme de SGK dans les cellules HEK-293. Il (1 μM) inhibe la phosphorylation du motif hydrophobe de S6K1 dans une mesure similaire à la phosphorylation de la boucle T dans les cellules HEK-293. Ce composé (3 μM) supprime également l'activité et la phosphorylation de S6K1 induites par la stimulation d'IGF1 de cellules HEK-293 privées de sérum. Il (3 μM) inhibe nettement la phosphorylation de plusieurs substrats d'Akt [FoxO (forkhead box O), GSK3 et PRAS40]. Ce produit chimique (3 μM) induit également une inhibition quasi maximale de l'activité et de la phosphorylation d'Akt1 en 5 min, et la phosphorylation des substrats d'Akt (FoxO, GSK3 et PRAS40) est inhibée à un moment légèrement plus tardif (10 min). Il (0,3 μM) inhibe significativement la phosphorylation d'Akt ou de PRAS40/GSK3 dans les cellules souches embryonnaires knock-in PDK1K^465E/K465E mais pas dans les cellules souches embryonnaires de type sauvage. Ce composé (1 μM) supprime efficacement l'activité de SGK1 comme en témoigne l'inhibition de la phosphorylation de NDRG1 dans les cellules de glioblastome U87. Il (1 μM) supprime également puissamment l'activation de S6K1 (Figure 7B) ainsi que de SGK1 dans les cellules MEF (fibroblastes embryonnaires de souris). Ce produit chimique (0,1 μM) induit ~50 % d'inhibition de l'activité de RSK2 dans les cellules HEK-293. [1]

Il (30 μM) supprime la force sensibilisée au Ca²⁺ induite par l'U46619 dans l'artère pulmonaire de lapin perméabilisée par l'α-toxine. Ce composé (30 μM) entraîne une diminution significative de la force contractile en réponse au [Ca²⁺]. [2]

Il (1 μM) entraîne une abolition totale de l'augmentation du calcium intracellulaire induite par l'EGF et de l'accumulation de phosphates d'inositol dans les cellules MDA-MB-231. Ce produit chimique (1 μM) inhibe la phosphorylation de PLCγ1 Tyr783 dans les cellules MDA-MB-231. [3]

Ce composé est un inhibiteur très spécifique et puissant de PDK1.

• Tests d'activité des kinases

  L'Akt, le S6K et le RSK endogènes sont immunoprécipités à partir de 0,1 mg à 1 mg de lysat cellulaire pendant 2 heures à 4 °C sur une plateforme vibrante en utilisant 3 μg–5 μg des anticorps indiqués. Pour les essais d'activité SGK, 150 μg de lysat transfecté sont incubés avec 5 μg de glutathion–Sepharose pendant 3 heures à 4 °C. Les immunoprécipités sont lavés deux fois avec un tampon de lyse contenant 0,5 mM de NaCl, suivis de deux lavages avec un tampon de kinase. Les réactions de kinase sont initiées par un mélange réactionnel pour amener les concentrations finales des composants réactionnels à 0,1 mM [γ-³²P]ATP (~200 c.p.m./pmol), 5 mM d'acétate de magnésium, 0,1 % de 2-mercaptoéthanol et 30 mM de peptide Crosstide (GRPRTSSFAEGKK). Les réactions sont effectuées pendant 20 min à 30 °C sur une plateforme vibrante et arrêtées en déposant les réactions sur du papier phosphocellulose P81. Le comptage Cerenkov est effectué après avoir lavé les papiers dans de l'acide phosphorique, rincé à l'acétone et séché à l'air. Une unité d'activité est définie comme celle qui a catalysé l'incorporation de 1 nmol de [³²P]phosphate dans le substrat sur 1 heure.

• Lignées cellulaires

  MDA-MB-231 cells

• Concentrations

  1 µM

• Temps dincubation

  30 minutes

• Méthode

  Cells were incubated with 1 µM of GSK2334470 for 30 minutes. Cells treated with DMSO were used as control.

• Modèles animaux

  Nude mice

• Posologies

  100 mg/kg

• Administration

  i.p.