CAL-101 (Idelalisib)

Idelalisib (CAL-101) n'est pas sensible aux autres sous-unités de la classe I de PI3K, y compris p110α, p110β et p110γ. Il bloque spécifiquement l'expression de CD63 médiée par FcϵR1 p110δ avec une EC50 de 8 nM dans les basophiles primaires. Ce composé présente une activité supérieure dans les cellules de leucémie lymphoblastique aiguë (B-ALL) à cellules B et de leucémie lymphoïde chronique (CLL) par rapport aux cellules de leucémie myéloïde aiguë (AML) et de néoplasie myéloproliférative (MPN). Il produit une réduction de pAktS473, pAktT308 et de la cible en aval S6 dans les cellules SU-DHL-5, KARPAS-422 et CCRF-SB avec une EC50 de 0,1 à 1,0 μM. [1]

Il induit une cytotoxicité sélective dans les cellules de LLC indépendamment du statut mutationnel d'IgVH ou de la cytogénétique interphase, principalement par un mécanisme dépendant des caspases. Le composé induit une cytotoxicité préférentiellement aux cellules de LLC par rapport aux cellules B normales, sans produire de cytotoxicité dans d'autres cellules hématopoïétiques, par rapport à LY294002. Il n'a pas de potentiel cytotoxique direct sur les lymphocytes T et les cellules tueuses naturelles (NK). Il peut inhiber la production de cytokines inflammatoires, telles que l'IL-6, l'IL-10, le TNF-α et l'IFN-γ, et de cytokines induites par l'activation, telles que le CD40L. Il antagonise également la survie des cellules de LLC médiée par le CD40L. [2]

Il induit une accumulation de cellules en G1 et une diminution de la population en phase S dans les cellules L1236 et L591, ce qui indique que ce composé est une nouvelle stratégie pour le traitement du lymphome de Hodgkin (HL). [3]

• Essai PI3K

  L'essai PI3K est réalisé sur des lysats de cellules entières de cellules de LLC ou de cellules B normales. Un essai ELISA PI3K est effectué. En bref, des extraits de cellules entières sont ajoutés à un mélange de substrat PI(4,5)P2 et de tampon de réaction contenant de l'adénosine triphosphate (ATP) et sont laissés à incuber à température ambiante. La réaction est arrêtée par l'ajout d'un détecteur de PI(3,4,5)P3 mélangé à de l'EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique) et laissée à incuber à température ambiante pendant 1 heure. Après ce temps, le mélange est transféré de chaque puits à une plaque ELISA PI3K et laissé à incuber pendant 1 heure. Les plaques sont lavées puis incubées avec un détecteur secondaire pendant 30 minutes. Les plaques sont lavées à nouveau, et une solution de 3,3′,5,5′-tétraméthylbenzidine est ajoutée pendant 5 minutes, après quoi du H2SO4 est ajouté pour arrêter toutes les réactions. Les plaques sont lues à 450 nm sur un lecteur de plaques 96 puits Labsystems.

• Lignées cellulaires

  CLL B cells or healthy volunteer T cells or NK cells

• Concentrations

  0.01-100 μM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  MTT assays are performed to determine cytotoxicity. 1 × 10⁵ cells are incubated with Idelalisib (CAL-101). MTT reagent is then added, and plates are incubated for an additional 20 hours before washing in phosphate-buffered saline. DMSO is added, and absorbance is measured by spectrophotometry at 540 nm in a Labsystems plate reader. Cell viability is also measured at various time points with the use of annexin/PI flow cytometry. Data are analyzed. At least 104 cells are counted for each sample. Results are expressed as the percentage of total positive cells over untreated control. Experiments examining caspase-dependent apoptosis included the addition of 100 μM Z-VAD. Experiments examining survival signals include the addition of 1 μg/mL CD40L, 800 U/mL IL-4, 50 ng/mL BAFF, 20 ng/mL TNF-α, or coculturing on fibronectin or stromal (HS-5 cell line) coated plates. Stromal coculture is done by plating a 75-cm² flask (80%-100% confluent) per 6-well plate 24 hours before the addition of CLL cells.