Capmatinib (INC280)

L'INCB28060 présente une puissance enzymatique picomolaire et est hautement spécifique pour c-MET avec une sélectivité plus de 10 000 fois supérieure à celle d'un large panel de kinases humaines. Ce composé inhibe la phosphorylation de c-MET humain et la signalisation médiatisée par c-MET dans les cellules cancéreuses. Il inhibe la prolifération et la survie des cellules dépendantes de c-MET, et prévient la croissance des cellules cancéreuses indépendantes de l'ancrage et la migration cellulaire. [1]

L'INCB28060 montre une forte activité antitumorale dans les modèles de tumeurs de souris dépendantes de c-MET, même un traitement oral de 0,03 mg/kg de ce composé provoque une inhibition d'environ 50 % de la phosphorylation de c-MET. Une inhibition dose-dépendante de la croissance tumorale est observée chez les souris porteuses de tumeurs. [1]

• Essai de la Kinase c-Met

  Le tampon d'essai contient 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂, 100 mM NaCl, 0,1 mg/ml BSA, 5mM DTT, pH 7,8. Pour HTS, 0,8 μL de 5 mM de ce composé dissous dans du DMSO sont déposés sur des plaques à 384 puits. Le titrage du DMSO suggère que la concentration maximale tolérée du solvant est de 4 %. Pour mesurer les IC50, la plaque INCB28060 est préparée par des dilutions en série de 3 fois et 11 points. 0,8 μL de ce produit chimique dans du DMSO est transféré de la plaque INCB28060 vers la plaque d'essai. La concentration finale de DMSO est de 2 %. Des solutions de 8 nM de c-Met non phosphorylé ou de 0,5 nM de c-Met phosphorylé sont préparées dans le tampon d'essai. Une solution mère de 1 mM de substrat peptidique Biotin-EQEDEPEGDYFEWLE-amide dissous dans du DMSO est diluée à 1 μM dans un tampon d'essai contenant 400 μM d'ATP (c-Met non phosphorylé) ou 160 uM d'ATP (c-Met phosphorylé). Un volume de 20 μL de solution enzymatique (ou de tampon d'essai pour le blanc enzymatique) est ajouté aux puits appropriés de chaque plaque, puis 20 μL/puits de solution de substrat pour initier la réaction. La plaque est protégée de la lumière et incubée à 25 °C pendant 90 minutes. La réaction est arrêtée par l'ajout de 20 μL d'une solution contenant 45 mM d'EDTA, 50 mM de Tris-HCl, 50 mM de NaCl, 0,4 mg/ml de BSA, 200 nM de SA-APC et 3 nM d'EUPy20. La plaque est incubée pendant 15 à 30 minutes à température ambiante et la HTRF (fluorescence résolue en temps homogène) est mesurée sur un instrument Perkin Elmer Fusion α-FP. Les paramètres du programme HTRF utilisés sont les suivants : Filtre d'excitation primaire 330/30, Fenêtre primaire : 200 uSec, Délai primaire : 50 uSec, Nombre d'éclairs : 15, Temps de lecture du puits : 2000

• Lignées cellulaires

  H441 cells

• Concentrations

  0.24, 1, 4, 16, 63 nM

• Temps dincubation

  24 hours

• Méthode

  H441 cells are seeded in RPMI-1640 medium containing 10% FBS and grown to complete confluence. Gaps are introduced by scraping cells with a P200 pipette tip. Cells are then stimulated with 50 ng/mL recombinant human HGF to induce migration across the gap in the presence of various concentrations of this compound. After an overnight incubation, representative photographs are taken and a semiqualitative assessment of inhibition of cell migration is conducted.

• Modèles animaux

  Eight-week-old female Balb/c nu/nu mice (Charles River) are inoculated subcutaneously with 4 × 10⁶ tumor cells (S114 model) or with 5 × 10⁶ tumor cells (U-87MG glioblastoma model).

• Posologies

  3, 10, 30 mg/kg

• Administration

  INCB28060 is orally dosed, twice each day.