Ivacaftor (VX-770)

L'Ivacaftor (VX-770) (10 μM) augmente significativement la sécrétion de Cl^- stimulée par la forskoline (I_T) d'environ 4 fois avec une EC50 de 100 nM dans les cellules thyroïdiennes de rat Fisher (FRT) recombinantes exprimant la mutation de gating G551D de CFTR, et d'environ 6 fois avec une EC50 de 25 nM dans les cellules recombinantes exprimant la mutation de traitement F508del corrigée en température de CFTR. Conformément aux augmentations de l'I_T stimulée par la forskoline, ce composé augmente la probabilité d'ouverture (P_o) des CFTR G551D, F508del et de type sauvage d'environ 6 fois, 5 fois et 2 fois, respectivement, indiquant qu'il agit directement sur CFTR pour augmenter son activité de gating. Dans les épithéliums bronchiques humains (HBE) de culture primaire atteints de mucoviscidose portant les mutations G551D et F508del de CFTR, l'Ivacaftor augmente puissamment l'I_T stimulée par la forskoline d'environ 10 fois, passant de 5 % à un niveau maximal de 48 % de celui mesuré dans les HBE non-mucoviscidosiques, avec une EC50 de 236 nM, démontrant une puissance environ 70 fois supérieure à celle de la génistéine, un potentiateur de CFTR couramment utilisé, qui a une EC50 de 16 μM. Dans les HBE avec CFTR F508del homozygote, il provoque une augmentation significative de l'I_T stimulée par la forskoline avec une EC50 de 22 nM, à un degré moindre de 4 % à 16 % des HBE non-mucoviscidosiques par rapport à l'effet dans les HBE G551D/F508del. En raison de la potentialisation de CFTR, ce composé inhibe l'absorption excessive de Na⁺ et de fluide médiatisée par l'ENaC avec une IC50 de 43 nM, et diminue la réponse, entraînant une augmentation du fluide de surface et de la fréquence de battement ciliaire (CBF) dans les HBE G551D/F508del. [1]

• Enregistrements en chambre d'Ussing

  L'effet d'Ivacaftor (VX-770) sur la sécrétion de Cl^- médiatisée par CFTR est caractérisé en mesurant l'I_T médiatisée par CFTR dans des chambres utilisant des cellules thyroïdiennes de rat Fisher (FRT) recombinantes exprimant G551D, ou F508del CFTR. Les cellules sont cultivées sur des inserts de culture cellulaire Costar Snapwell maintenus à 37 °C avant l'enregistrement. Les inserts de culture cellulaire sont montés dans une chambre d'Ussing pour enregistrer l'I_T en mode de voltage-clamp (V_hold = 0 mV). Pour les cellules FRT, la membrane basolatérale est un gradient de Cl^- basolatéral à apical est établi. La solution de bain basolatéral contient 135 mM de NaCl, 1,2 mM de CaCl₂, 1,2 mM de MgCl₂, 2,4 mM de K₂HPO₄, 0,6 mM de KHPO₄, 10 mM de N-2-hydroxyéthylpipérazine-N

• Lignées cellulaires

  FRT and NIH 3T3 cells

• Concentrations

  100/25 nM

• Temps dincubation

  24 h

• Méthode

  Cells were treated with various concentrations of Ivacaftor (VX-770).

• Modèles animaux

  Male Sprague-Dawley rats

• Posologies

  3 mg/kg

• Administration

  i.v.