LDN-57444

N° de catalogueS7135 Lot :S713501

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Données techniques

Formule

C₁₇H₁₁Cl₃N₂O₃

Poids moléculaire

397.64

Numéro CAS

668467-91-2

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

11 mg/mL (27.66 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 Corn oil Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	6.000mg/ml (15.09mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 120 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	0.500mg/ml (1.26mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

LDN-57444 est un inhibiteur réversible et compétitif du protéasome pour Uch-L1 avec une IC50 de 0,88 μM, une sélectivité 28 fois supérieure à l'isoforme Uch-L3.

Cibles

UCH-L1	UCH-L1	UCH-L3
0.4 μM(Ki)	0.88 μM	25 μM

In vitro

Le traitement avec 50 μM de LDN-57444 pendant 24 h entraîne une inhibition de 70 % de l'activité du protéasome. Ce composé provoque une diminution significative et dose-dépendante de la viabilité cellulaire à des concentrations supérieures à 25 μM, et la viabilité cellulaire est réduite à 61,81 % à 50 μM. Il est capable de provoquer la mort cellulaire par la voie de l'apoptose en diminuant l'activité du système ubiquitine protéasome et en augmentant les niveaux de protéines fortement ubiquitinylées, ce qui peut activer la réponse aux protéines mal repliées. L'apoptose induite par cette substance chimique peut être déclenchée par l'activation du stress du réticulum endoplasmique (ERS).

In vivo

LDN-57444 provoque des altérations dramatiques de la distribution des protéines synaptiques et de la morphologie des épines in vivo. Le traitement avec ce composé entraîne également une chute rapide de l'activité de l'Uch-L1, mais l'inhibition du protéasome n'a aucun effet sur les niveaux de cAMP sur une période de plusieurs heures.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Criblage HTS Pour démarrer un dosage, 0,5 μL de composé d'essai à 5 mg/mL (environ 50 μM de concentration de réaction finale) ou de contrôle DMSO sont aliquotes dans chaque puits. L'enzyme et le substrat sont préparés dans le tampon de réaction UCH (50 mM Tris-HCl [pH 7,6], 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT et 0,5 mg/mL d'ovalbumine). 25 μL de 0,6 nM UCH-L1 sont ensuite ajoutés à chaque puits, à l'exception des puits de contrôle du substrat, suivis d'une agitation de la plaque pendant 45 à 60 s sur un agitateur automatique. Le mélange enzyme/composé est incubé à température ambiante pendant 30 min avant l'ajout de 25 μL de 200 nM Ub-AMC pour initier la réaction enzymatique. Le mélange réactionnel (300 pM UCH-L1, 100 nM Ubiquitin-AMC avec 2,5 μg de composé d'essai) est incubé à température ambiante pendant 30 minutes supplémentaires avant d'arrêter la réaction par l'ajout de 10 μL d'acide acétique 500 mM par puits. L'intensité d'émission de fluorescence est mesurée sur un LJL Analyst à l'aide d'un ensemble de filtres à la coumarine (ex = 365 nm, em = 450 nm) et est soustraite de la fluorescence intrinsèque du composé pour révéler l'activité enzymatique. Un contrôle DMSO (0,5 μL de DMSO, 25 μL d'UCH-L1, 25 μL d'ubiquitine-AMC, 10 μL d'acide acétique), un contrôle enzymatique (25 μL d'UCH-L1, 25 μL de tampon, 10 μL d'acide acétique), un contrôle de substrat (25 μL de tampon, 25 μL d'ubiquitine-AMC, 10 μL d'acide acétique) et un contrôle inhibiteur (0,5 μL d'aldéhyde d'ubiquitine [stock 100 nM], 25 μL d'UCH-L1, 25 μL d'ubiquitine-AMC, 10 μL d'acide acétique) sont également réalisés dans chaque plaque d'essai pour assurer la qualité et la reproductibilité. Les inhibiteurs potentiels d'UCH-L1 sont sélectionnés si les composés ont démontré une inhibition supérieure à 60 % par rapport aux contrôles. Les réactions enzymatiques d'UCH-L1 sont répétées manuellement deux fois en utilisant le même protocole pour confirmer les résultats des composés « hit » du criblage robotisé primaire.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires H1299 Concentrations ~5 μM Temps dincubation 24 h Méthode MTT assay was performed to evaluate the cytotoxic effect of LDN-57444 (also known as ubiquitin aldehyde) on cancer cell lines. The results indicated that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis revealed that the inhibitory effect of this chemical was more pronounced in metastatic cells compared to primary tumor cells. Time-course experiments demonstrated sustained activity of the compound over 72 hours. Molecular docking studies suggested a high binding affinity between this chemical and the target protein. These findings highlight the potential of the compound as a therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Test kinase :^{^[1]}

Criblage HTS
Pour démarrer un dosage, 0,5 μL de composé d'essai à 5 mg/mL (environ 50 μM de concentration de réaction finale) ou de contrôle DMSO sont aliquotes dans chaque puits. L'enzyme et le substrat sont préparés dans le tampon de réaction UCH (50 mM Tris-HCl [pH 7,6], 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT et 0,5 mg/mL d'ovalbumine). 25 μL de 0,6 nM UCH-L1 sont ensuite ajoutés à chaque puits, à l'exception des puits de contrôle du substrat, suivis d'une agitation de la plaque pendant 45 à 60 s sur un agitateur automatique. Le mélange enzyme/composé est incubé à température ambiante pendant 30 min avant l'ajout de 25 μL de 200 nM Ub-AMC pour initier la réaction enzymatique. Le mélange réactionnel (300 pM UCH-L1, 100 nM Ubiquitin-AMC avec 2,5 μg de composé d'essai) est incubé à température ambiante pendant 30 minutes supplémentaires avant d'arrêter la réaction par l'ajout de 10 μL d'acide acétique 500 mM par puits. L'intensité d'émission de fluorescence est mesurée sur un LJL Analyst à l'aide d'un ensemble de filtres à la coumarine (ex = 365 nm, em = 450 nm) et est soustraite de la fluorescence intrinsèque du composé pour révéler l'activité enzymatique. Un contrôle DMSO (0,5 μL de DMSO, 25 μL d'UCH-L1, 25 μL d'ubiquitine-AMC, 10 μL d'acide acétique), un contrôle enzymatique (25 μL d'UCH-L1, 25 μL de tampon, 10 μL d'acide acétique), un contrôle de substrat (25 μL de tampon, 25 μL d'ubiquitine-AMC, 10 μL d'acide acétique) et un contrôle inhibiteur (0,5 μL d'aldéhyde d'ubiquitine [stock 100 nM], 25 μL d'UCH-L1, 25 μL d'ubiquitine-AMC, 10 μL d'acide acétique) sont également réalisés dans chaque plaque d'essai pour assurer la qualité et la reproductibilité. Les inhibiteurs potentiels d'UCH-L1 sont sélectionnés si les composés ont démontré une inhibition supérieure à 60 % par rapport aux contrôles. Les réactions enzymatiques d'UCH-L1 sont répétées manuellement deux fois en utilisant le même protocole pour confirmer les résultats des composés « hit » du criblage robotisé primaire.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
H1299
Concentrations
~5 μM
Temps dincubation
24 h
Méthode
MTT assay was performed to evaluate the cytotoxic effect of LDN-57444 (also known as ubiquitin aldehyde) on cancer cell lines. The results indicated that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis revealed that the inhibitory effect of this chemical was more pronounced in metastatic cells compared to primary tumor cells. Time-course experiments demonstrated sustained activity of the compound over 72 hours. Molecular docking studies suggested a high binding affinity between this chemical and the target protein. These findings highlight the potential of the compound as a therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14522054/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22514658/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16923396/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18622688/

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Validation du produit par le client

: Données de [ , , J Cell Mol Med, 2017, 1-16 ]

Sellecks LDN-57444 A été cité par 13 Publications

Ubiquitin C-terminal hydrolase L1 promoted pro-angiogenic capacity of periodontal ligament stem cells via HIF-1α/YAP signaling in periodontitis [ Stem Cell Res Ther, 2025, 16(1):271]	PubMed: 40457476
Deficiency of UCHL1 results in insufficient decidualization accompanied by impaired dNK modulation and eventually miscarriage [ J Transl Med, 2024, 22(1):478]	PubMed: 38769534
The Suppression of Ubiquitin C-Terminal Hydrolase L1 Promotes the Transdifferentiation of Auditory Supporting Cells into Hair Cells by Regulating the mTOR Pathway [ Cells, 2024, 13(9)737]	PubMed: 38727276
Stem Cell Properties of Gastric Cancer Stem-Like Cells under Stress Conditions Are Regulated via the c-Fos/UCH-L3/β-Catenin Axis [ Mol Cells, 2023, 46(8):476-485]	PubMed: 37460253
UCHL1 regulates inflammation via MAPK and NF-κB pathways in LPS-activated macrophages [ Cell Biol Int, 2021, 10.1002/cbin.11662]	PubMed: 34288216
Long-term inhibition of UCHL1 decreases hypertension and retinopathy in spontaneously hypertensive rats [ J Int Med Res, 2021, 49(6):3000605211020641]	PubMed: 34130526
The Deubiquitinating Enzyme UCHL1 Promotes Resistance to Pemetrexed in Non-Small Cell Lung Cancer by Upregulating Thymidylate Synthase [ Theranostics, 2020, 15;10(13):6048-6060]	PubMed: 32483437
Deubiquitination of CD36 by UCHL1 promotes foam cell formation [ Cell Death Dis, 2020, 11(8):636]	PubMed: 32801299
Blockage of UCHL1 Activity Attenuates Cardiac Remodeling in Spontaneously Hypertensive Rats [ Hypertens Res, 2020, 10.1038/s41440-020-0486-1]	PubMed: 32541849
UCH-L1 inhibitor LDN-57444 hampers mouse oocyte maturation by regulating oxidative stress and mitochondrial function and reducing ERK1/2 expression [ Biosci Rep, 2020, 40(10)BSR20201308]	PubMed: 33030206

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