E7080 (Lenvatinib)

E7080, en tant qu'inhibiteur puissant de l'angiogenèse in vitro, montre un effet inhibiteur significatif sur la signalisation VEGF/KDR et SCF/Kit. Selon les tests de tyrosine kinase et de sérine/thréonine kinase in vitro, ce composé inhibe Flt-1, KDR, Flt-4 avec une IC50 de 22, 4,0 et 5,2 nM, respectivement. En plus de ces kinases, ce composé inhibe également les Protein Tyrosine Kinase FGFR1 et PDGFR avec des valeurs d'IC50 de 46, 51 et 100 nM pour FGFR1, PDGFRα et PDGFRβ, respectivement. [1] Ce composé inhibe puissamment la phosphorylation de VEGFR2 (IC50, 0,83 nM) et VEGFR3 (IC50, 0,36 nM) dans les HUVEC qui est stimulée par le VEGF et le VEGF-C, respectivement. [2] Une étude récente montre que le traitement par ce composé (à 1 μM et 10 μM) entraîne une inhibition significative de la migration et de l'invasion cellulaire en inhibant la signalisation FGFR et PDGFR. [3]

Lorsqu'il est administré par voie orale dans un modèle de xénogreffe H146, le Lenvatinib (E7080) inhibe la croissance de la tumeur H146 à 30 et 100 mg/kg de manière dose-dépendante et entraîne une régression tumorale à 100 mg/kg. De plus, ce composé à 100 mg/kg diminue la densité des microvaisseaux plus que le traitement par anticorps anti-VEGF et imatinib. [1] Il inhibe significativement la croissance tumorale locale dans un modèle de coussinet adipeux mammaire (m.f.p.) MDA-MB-231 avec des RTV (volume tumoral calculé au jour 8/volume tumoral au jour 1) de 0,81, et réduit à la fois l'angiogenèse et la lymphangiogenèse des nodules métastatiques établis de la tumeur MDA-MB-231 dans les ganglions lymphatiques. [2]

• Essai kinase in vitro [1]

  Les essais de Protein Tyrosine Kinase sont réalisés par HTRF (KDR, VEGFR1, FGFR1, c-Met, EGFR) et ELISA (PDGFRβ), en utilisant les domaines kinase recombinants des récepteurs. Dans les deux essais, 4 μL de dilutions en série de ce composé sont mélangés dans une plaque à 96 puits à fond rond avec 10 μL d'enzyme, 16 μL de solution de poly (GT) (250 ng) et 10 μL de solution d'ATP (1 μM ATP) (la concentration finale de DMSO est de 0,1%). Dans les puits pour les blancs, aucune enzyme n'est ajoutée. Dans les puits de contrôle, aucun article testé n'est ajouté. La réaction de la kinase est initiée en ajoutant une solution d'ATP à chaque puits. Après 30 minutes d'incubation à 30°C, la réaction est arrêtée par l'ajout de 0,5 M d'EDTA (10 μL/puits) au mélange réactionnel dans chaque puits. Un tampon de dilution adéquat à chaque essai kinase est ajouté au mélange réactionnel. Dans l'essai HTRF, 50 μL du mélange réactionnel sont transférés dans une plaque EIA/RIA noire à 96 puits et 1/2 surface, une solution HTRF (50 μL/puits) est ajoutée au mélange réactionnel, puis l'activité kinase est déterminée par mesure de la fluorescence avec un détecteur de fluorescence résolu en temps à une longueur d'onde d'excitation de 337 nm et des longueurs d'onde d'émission de 620 et 665 nm. Dans l'ELISA, 50 μL du mélange réactionnel sont incubés dans des plaques de polystyrène à 96 puits revêtues d'avidine à température ambiante pendant 30 minutes. Après lavage avec le tampon de lavage, une solution de PY20-HRP (70 μL/puits) est ajoutée et le mélange réactionnel est incubé à température ambiante pendant 30 minutes. Après lavage avec le tampon de lavage, un réactif TMB (100 μL/puits) est ajouté à chaque puits. Après plusieurs minutes (10 à 30 minutes), 1 M H₃PO₄ (100 μL/puits) est ajouté à chaque puits. L'activité kinase est déterminée par mesure de l'absorbance à 450 nm avec un lecteur de microplaques.

• Lignées cellulaires

  HUVECs

• Concentrations

  0-10 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  HUVECs (1,000 cells in each well in serum-free medium containing 2% fetal bovine serum) and L6 rat skeletal muscle myoblasts (5,000 cells in each well in serum-free DMEM) are dispensed in a 96-well plate and incubated overnight. This compound and either VEGF (20 ng/mL) or FGF-2 (20 ng/mL) containing 2% fetal bovine serum and PDGFβ (40 ng/mL) are added to each well. Cells are incubated for 3 days and then the ratios of surviving cells are measured by WST-1 reagent. For proliferation assay, samples are duplicated and three separate experiments are done.

• Modèles animaux

  H146 tumor cells are implanted subcutaneously (s.c.) into the flank region of female BALB/c nude mice.

• Posologies

  ≤100 mg/kg

• Administration

  Administered via p.o.