Maraviroc (UK-427857)

Le Maraviroc inhibe la liaison du γ-S-GTP stimulée par le MIP-1β aux membranes des cellules HEK-293, indiquant sa capacité à inhiber la stimulation dépendante des chimiokines de l'échange GDP-GTP au niveau du complexe CCR5/protéine G. Ce composé inhibe également l'événement en aval de la redistribution du calcium intracellulaire induite par les chimiokines, avec des IC50 allant de 7 à 30 nM obtenues contre le MIP-1β, le MIP-1α et le RANTES. Dans les mêmes expériences, il ne déclenche pas la libération de calcium intracellulaire à des concentrations allant jusqu'à 10 μM, indiquant qu'il est dépourvu d'activité agoniste du CCR5. Conformément à cela, ce produit chimique ne parvient pas à induire l'internalisation du CCR5. Il est actif à de faibles concentrations nanomolaires contre le HIV-1 Ba-L. Ce composé inhibe les 200 virus pseudotypés avec une IC90 moyenne géométrique de 13,7 nM. [1] À des concentrations >1000 fois la concentration inhibitrice de 50%, il n'a pas inhibé d'autres récepteurs de chimiokines (CCR1, 2, 3, 4, 7 et 8 ; CXCR1 et 2) à un degré cliniquement pertinent[3].

Les valeurs de demi-vie du Maraviroc sont de 0,9 heure chez le rat et de 2,3 heures chez le chien. Après administration orale (2 mg/kg) au chien, le Cmax (256 ng/ml) est atteint 1,5 heure après la dose, et la biodisponibilité est de 40%. Chez le rat, environ 30% de la dose administrée est absorbée par le tractus intestinal. [1] Des souris RAG-hu femelles sont défiées par voie vaginale avec le HIV-1 une heure après l'application intravaginale du gel de composé. Les souris traitées avec ce gel sont entièrement protégées contre le défi vaginal par le HIV-1, contrairement aux souris traitées avec le gel placebo qui sont toutes devenues infectées. L'administration vaginale de ce composé protège entièrement les souris contre le défi vaginal par le HIV-1. Bien qu'il y ait une diminution claire des lymphocytes T CD4 chez les souris traitées avec le gel placebo et défiées viralement, leurs niveaux sont stables chez les souris recevant ce gel chimique. [2]

• Inhibition de la liaison des chimiokines au CCR5

  La liaison de MIP-1α, MIP-1β et RANTES marqués au ¹²⁵I au CCR5 est mesurée en utilisant des cellules HEK-293 intactes exprimant de manière stable le récepteur ou des préparations membranaires de celles-ci. Brièvement, les cellules sont resuspendues dans un tampon de liaison (50 mM HEPES contenant 1 mM de CaCl₂, 5 mM de MgCl₂ et 0,5% d'albumine sérique bovine [BSA] et ajusté à pH 7,4) à une densité de 2 × 10⁶ cellules/ml. Pour les préparations membranaires, les cellules lavées au phosphate-buffered saline (PBS) sont resuspendues dans un tampon de lyse (20 mM HEPES, 1 mM CaCl₂, 1 comprimé COMPLETE pour 50 mL, pH 7,4) avant homogénéisation dans un homogénéisateur à main Polytron, ultracentrifugation (40 000× g pendant 30 min), et resuspension dans un tampon de liaison à une concentration protéique de 0,25 mg/mL (12,5 μg de protéine membranaire est utilisé dans chaque puits d'une plaque à 96 puits). Le MIP-1α, le MIP-1β et le RANTES radiomarqués au ¹²⁵I sont préparés et dilués dans un tampon de liaison à une concentration finale de 400 pM dans l'essai. Les dilutions de ce composé sont ajoutées à chaque puits pour un volume final de 100 μL, les plaques d'essai incubent pendant 1 heure, et les contenus sont filtrés à travers des plaques Unifilter pré-bloquées et lavées qui sont comptées après séchage pendant la nuit.

• Lignées cellulaires

  PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells

• Concentrations

  0-1 μM

• Temps dincubation

  5 days or 7 days

• Méthode

  Drug susceptibility assays are performed in 24-well tissue culture plates. Duplicate eight-point dilution series of Maraviroc are prepared in DMSO and medium to yield a final DMSO concentration of 0.1% (vol/vol) in the assay. PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells are infected with virus for 1 hour at 37 °C. Cells are subsequently washed once, and 3.6 × 10⁵ PBMC or 2.0 × 10⁵ PM-1 cells are added to each well of assay plates containing diluted this compound. Plates are incubated for 5 days (lab-adapted strains) or 7 days (primary isolates) at 37 °C in a humidified 5% CO₂ (vol/vol) atmosphere.

• Modèles animaux

  Humanized BALB/c-Rag2−/−γc−/− and BALB/c-Rag1−/−γc−/− (RAG-hu) mice

• Posologies

  ~64 μg

• Administration

  A 25 μL volume of the gel formulation is carefully applied in to the vaginal vault of mice.