Mirin

Mirin inhibe l'activation d'ATM induite par les DSB, la phosphorylation des cibles en aval Nbs1 et Chk2 dépendante d'ATM, et l'autophosphorylation d'ATM en Ser1981 dépendante de MRN en réponse aux DSB. Ce composé inhibe également le point de contrôle G2 dans les cellules TOSA4, et la réparation de l'ADN dépendante de l'homologie dans les cellules HEK293. [1]

Dans les cellules avec HPV16 intégré (SiHa), il sensibilise les épisomes HPV au PA25, ce qui entraîne une réduction d'environ 5 fois de l'IC50 du PA25. [2]

Le prétraitement avec ce produit chimique diminue également la viabilité cellulaire et inhibe l'expression de l'antigène nucléaire des cellules proliférantes dans les cellules rénales embryonnaires humaines 293 traitées au cisplatine. [3]

Mirin dans les nanoparticules a entraîné une forte altération de la croissance tumorale, associée à l'activation du DDR, à l'accumulation de p53 et à la mort cellulaire.

• Essai de nucléase

  Les réactions avec des substrats oligonucléotidiques non en épingle à cheveux contiennent 25 mM de MOPS (pH 7,0), 60 mM de KCl, 0,2 % de Tween 20, 2 mM de DTT, 1 mM ou 5 de MnCl₂ (ou 5 mM de MgCl₂, ou 5 mM de CaCl₂), 0,1 pmol de substrat d'ADN et 0,3 pmol de Mre11 (ou une quantité équivalente de Mre11 complexé avec Rad50) dans un volume de 10 μl, et sont incubées à 37 °C pendant 30 min. Le SDS, l'EDTA et la protéinase K sont ensuite ajoutés à des concentrations finales de 0,2 %, 5 mM et 0,1 mg/ml, respectivement, et incubés pendant 15 min supplémentaires. 4 μl de chaque réaction sont mélangés avec 4 μl de tampon de charge au formamide, puis chargés sur un gel de séquençage contenant 10 % d'acrylamide et 7 M d'urée. Après la migration, chaque gel est analysé à l'aide d'un système de phosphorimagerie. Les réactions contenant des substrats en épingle à cheveux sont identiques à celles avec des substrats non en épingle à cheveux, à l'exception que 3 pmol de ce composé sont ajoutés aux réactions comme indiqué, et les réactions sont incubées à température ambiante pendant une nuit. Les réactions de jonction d'extrémités non homologues contiennent 25 mM de MOPS (pH 7,0), 60 mM de KCl, 0,2 % de Tween 20, 2 mM de DTT, 4 mM de MgCl₂, 2 mM de MnCl₂, 0,5 mM d'ATP, 4 ng d'ADN plasmidique, 10 % de polyéthylène glycol, 0,01 pmol d'ADN ligase I humaine et 0,06 pmol de ce produit chimique ou 0,1 unités d'exonucléase III d'E. coli (GIBCO-BRL), dans un volume de 10 μl. Après incubation à 37 °C pendant 25 min, le Tween 20 est ajouté à une concentration finale de 0,5 %, et une aliquote de 2,5 μl est amplifiée par PCR en utilisant les amorces DAR5 et DAR147. Les produits de PCR sont clonés en utilisant le kit de clonage TA et séquencés en utilisant un analyseur génétique capillaire ABI automatisé.

• Lignées cellulaires

  HEK 293 cells

• Concentrations

  100 μM

• Temps dincubation

  24 h

• Méthode

  Human embryonic kidney (HEK) 293 cells are maintained in RPMI-1640 supplemented with 5% heat-inactivated fetal bovine serum, penicillin (100 U/mL), and streptomycin (100 mg/mL) in humidified air with 5% CO₂ at 37 °C. Cells are given fresh medium at 48 h intervals. The cells are seeded in 96-well plates in regular growth medium. Cells are pretreated with mirin (100 μM for 1 h before the cisplatin (20 μM) treatment followed by incubation for 8 and 24 h. The MTT assay is performed using the EZ-Cytox cell viability assay kit according to the manufacturer's protocol and MTT reduction is measured at a 450 nm wavelength using a micro-plate reader.