MRT67307 HCl

Dans les macrophages, le MRT67307 prévient la phosphorylation d'IRF3 et la production d'IFNβ. Dans les MEF de type sauvage, le MRT67307 améliore la phosphorylation de p105 stimulée par l'IL-1 en Ser933 et de RelA en Ser468 et Ser536, et améliore également l'activation de la transcription génique dépendante de NF-κB stimulée par l'IL-1. [1] Le MRT67307 augmente la production d'IL-10 et supprime la production de cytokines pro-inflammatoires via un mécanisme dépendant du coactivateur transcriptionnel (CRTC) 3 régulé par la protéine de liaison à l'élément de réponse au cAMP (CREB). [2] De plus, le MRT67307 inhibe ULK et bloque l'autophagy dans les cellules MEF. [3]

• Tests de protéine kinase

  Les substrats et les kinases sont dilués dans 50 mM Tris/HCl (pH 7,5), 0,1 % 2-mercaptoéthanol, 0,1 mM EGTA et 10 mM acétate de magnésium. Les réactions sont initiées avec [γ-³²P]ATP (2500 c.p.m./pmol) à une concentration finale de 0,1 mM et terminées après 15 min à 30 °C par l'ajout de SDS et d'EDTA (pH 7,0) à des concentrations finales de 1,0 % (p/v) et 20 mM respectivement. Après chauffage pendant 5 min à 100 °C et séparation par SDS/PAGE, les protéines phosphorylées sont détectées par autoradiographie.

• Lignées cellulaires

  MEFs and 293T cells

• Concentrations

  10 μM

• Temps dincubation

  1 h

• Méthode

  MEFs and 293T cells were grown in DMEM, supplemented with 10% fetal bovine serum and penicillin/streptomycin, and cultured at 37 °C, 5% CO2. For induction of autophagy, cells were typically grown to 75% confluency, washed twice, and incubated in Earle's balanced salt solution (EBSS) for 1 h (or complete medium as a control) in the presence or absence of 10 μM MRT67307, 1 μM MRT68921, or 50 nM bafilomycin A1 and followed by lysis and immunoblotting with the indicated antibodies.