Fiche technique

Description biologique

Spécificité	NCX1 Antibody [C23J23] détecte les niveaux endogènes de la protéine NCX1 totale.
Contexte	NCX1 (échangeur sodium-calcium 1) est une protéine membranaire intégrale exprimée de manière ubiquitaire, cruciale pour l'homéostasie cellulaire du Ca²⁺, en particulier dans le cœur et le cerveau, où elle échange le Ca²⁺ intracellulaire contre le Na⁺ extracellulaire pour réguler le couplage excitation-contraction et la signalisation neuronale. Structurellement, NCX1 contient neuf segments transmembranaires avec deux régions de répétition α (impliquées dans la liaison et le transport des ions) et une grande boucle intracellulaire entre les TMS 5 et 6 abritant des régions de répétition β qui lient le Ca²⁺ régulateur. Il existe sous plusieurs variants d'épissage avec des phénotypes régulateurs spécifiques aux tissus, NCX1.1 étant l'isoforme cardiaque prédominante. La fonction de NCX1 est modulée par des facteurs locaux, les concentrations ioniques, les lipides et la phosphorylation par des kinases telles que PKA et PKC au sein d'un complexe macromoléculaire contenant mAKAP, des phosphatases (PP1, PP2A) et d'autres protéines régulatrices. Dans les cardiomyocytes, cette organisation permet une régulation β-adrénergique précise, bien que des altérations telles que l'hyperphosphorylation et une réactivité atténuée se produisent dans l'insuffisance cardiaque, soulignant son importance dans les conditions physiologiques et pathologiques.

Spécificité

NCX1 Antibody [C23J23] détecte les niveaux endogènes de la protéine NCX1 totale.

Contexte

NCX1 (échangeur sodium-calcium 1) est une protéine membranaire intégrale exprimée de manière ubiquitaire, cruciale pour l'homéostasie cellulaire du Ca²⁺, en particulier dans le cœur et le cerveau, où elle échange le Ca²⁺ intracellulaire contre le Na⁺ extracellulaire pour réguler le couplage excitation-contraction et la signalisation neuronale. Structurellement, NCX1 contient neuf segments transmembranaires avec deux régions de répétition α (impliquées dans la liaison et le transport des ions) et une grande boucle intracellulaire entre les TMS 5 et 6 abritant des régions de répétition β qui lient le Ca²⁺ régulateur. Il existe sous plusieurs variants d'épissage avec des phénotypes régulateurs spécifiques aux tissus, NCX1.1 étant l'isoforme cardiaque prédominante. La fonction de NCX1 est modulée par des facteurs locaux, les concentrations ioniques, les lipides et la phosphorylation par des kinases telles que PKA et PKC au sein d'un complexe macromoléculaire contenant mAKAP, des phosphatases (PP1, PP2A) et d'autres protéines régulatrices. Dans les cardiomyocytes, cette organisation permet une régulation β-adrénergique précise, bien que des altérations telles que l'hyperphosphorylation et une réactivité atténuée se produisent dans l'insuffisance cardiaque, soulignant son importance dans les conditions physiologiques et pathologiques.

Informations dutilisation

Application

IHC, FCM

Dilution

IHC	FCM
1:200	1:20 - 1:100

Réactivité

Human

Source

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Tampon de stockage

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Stockage
(À partir de la date de réception)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Méthodes expérimentales
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Méthodes expérimentales

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12754202/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17303833/

Données dapplication

IHC

Validé par Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human gastric cancer tissue with F2381 at 1:1000 dilution.