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In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble. * Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre. * Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)
Préparation des solutions mères
Activité biologique
Description
NVP-BVU972 est un inhibiteur sélectif et puissant de Met (c-Met) avec une IC50 de 14 nM.
Cibles
Met
14 nM
In vitro
NVP-BVU972 inhibe puissamment la kinase MET mais présente une faible inhibition contre d'autres kinases, y compris la kinase RON la plus étroitement liée, avec des valeurs d'IC50 supérieures à 1000 nM. Ce composé supprime également la phosphorylation constitutive de MET dans les cellules GTL-16 ou la phosphorylation de MET stimulée par le HGF dans les cellules A549 avec des valeurs d'IC50 de 7,3 nM et 22 nM, respectivement. Il prévient puissamment la croissance des lignées cellulaires GTL-16, MKN-45 et EBC-1 amplifiées par le gène MET avec des valeurs d'IC50 de 66 nM, 82 nM et 32 nM, respectivement. Conformément à leur fréquence élevée dans ce criblage de composés, les mutations Y1230 et D1228 entraînent des changements spectaculaires dans les valeurs d'IC50 mesurées pour celui-ci dans la lignée cellulaire BaF3. La résistance déclenchée par V1155L est plus limitée à ce produit chimique. Une réduction dose-dépendante de la phosphorylation de TPR-MET lors de son application aux cellules BaF3 exprimant le TPR-MET de type sauvage. Les mutations Y1230H et D1228A ont toutes deux abrogé l'effet de ce composé mais pas celui de l'AMG 458. Cependant, F1200I et L1195V interfèrent avec la puissance de celui-ci pour empêcher la phosphorylation de TPR-MET.
Test biochimique TR-FRET avec MET de type sauvage et mutants
L'activité enzymatique est mesurée dans un dosage par transfert d'énergie par résonance de fluorescence résolue dans le temps (TR-FRET), détectant la phosphorylation de la tyrosine avec un anticorps anti-phospho-tyrosine marqué à l'Eu (donneur de fluorescence) et de l'allophycocyanine conjuguée à la streptavidine (accepteur de fluorescence) qui se lie à une biotine sur le peptide substrat. Pour chaque variant, les concentrations Km pour l'ATP sont déterminées en l'absence de ce composé, et la concentration d'ATP dans la réaction de la kinase est fixée à Km (4 μM pour MET wt, 1 μM pour MET Y1230H et MET F1200I). Il est dissous et dilué dans du DMSO et testé en quadruplicata. Les réactions de la kinase sont effectuées dans 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 8 mM MgCl2, 4 mM MnCl2, 0,05 % Tween 20, 0,05 % albumine sérique bovine, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,1 mM Na3VO4, dans des plaques blanches de 1536 puits à température ambiante. Ce produit chimique et l'enzyme sont incubés dans un volume de 2 μL pendant 20 min, suivi de l'ajout de 1 μL d'ATP et de 1 μL de substrat peptidique biotinylé (PTK1) à des concentrations finales de Km et 1 μM, respectivement. Les concentrations enzymatiques dans les réactions sont de 5 nM pour MET wt et de 4 nM pour les variants F1200I et Y1230H. Après 90 min, les réactions sont arrêtées par l'ajout de 1 μL de solution d'arrêt/détection pour atteindre des concentrations finales de 10 mM EDTA, 3,5 nM d'anticorps anti-phospho-tyrosine marqué à l'Eu PY20 et 10 nM de streptavidine allophycocyanine. Le transfert d'énergie par résonance de fluorescence résolue dans le temps est mesuré dans un lecteur de plaques Envision (excitation 320 nm, émission 615 nm et 665 nm).
BaF3 cells containing TPR-MET or various mutants thereof are grown in RPMI 1640 medium containing 10% fetal calf serum. For maintenance of parental BaF3 cells the medium is additionally supplemented with 10 ng/mL interleukin-3 (IL-3). For proliferation assays, BaF3 cells are seeded on 96-well-plates in triplicates at 104 cells per well and incubated with various concentrations of this compound for 72 hours followed by quantification of viable cells using a resazurin sodium salt dye reduction readout. IC50 values are determined with the XLFit Excel Add-In using a 4-parameter dose response model.
Références
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21697284/
Sellecks NVP-BVU972 A été cité par 1 Publication
A chemical screen for modulators of mRNA translation identifies a distinct mechanism of toxicity for sphingosine kinase inhibitors
[ PLoS Biol, 2021, 19(5):e3001263]
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