AZD2281 (Olaparib)

Olaparib (AZD2281) agirait contre les mutations BRCA1 ou BRCA2 et n'est pas sensible à la tankyrase-1 (IC50 >1 μM). Il pourrait abolir l'activité PARP-1 à des concentrations de 30 à 100 nM dans les cellules SW620. Ce composé est hypersensible aux lignées cellulaires déficientes en BRCA1 (MDA-MB-463 et HCC1937), comparativement aux lignées cellulaires compétentes en BRCA1 et BRCA2 (Hs578T, MDA-MB-231 et T47D). [1] Il est fortement sensible aux cellules KB2P en raison de la suppression de la réparation par excision de base par l'inhibition de PARP, ce qui peut entraîner la conversion de ruptures simple brin en ruptures double brin pendant la réplication de l'ADN, activant ainsi les voies de recombinaison dépendantes de BRCA2. [2]

Olaparib (AZD2281) (10 mg/kg, p.o.) en combinaison supprime significativement la croissance tumorale dans les xénogreffes SW620. [1] Il montre une excellente réponse aux tumeurs mammaires Brca1^-/-;p53^-/- (50 mg/kg i.p. par jour), tandis qu'aucune réponse aux tumeurs mammaires Ecad^-/-;p53^-/- déficientes en HR. Ce composé ne montre même pas de toxicité limitant la dose chez les souris porteuses de tumeurs. [3] Il a été utilisé pour traiter les tumeurs mutées BRCA, telles que les cancers de l'ovaire, du sein et de la prostate. De plus, il montre une inhibition sélective des cellules tumorales déficientes en ATM (Ataxia Telangiectasia Mutated), ce qui indique qu'il pourrait être un agent potentiel pour le traitement des tumeurs lymphoïdes mutées ATM. [4]

• Essai FlashPlate (essai de criblage à 96 puits)

  Dans les colonnes 1 à 10, 1 μL d'Olaparib (AZD2281) (dans du DMSO) est ajouté, et 1 μL de DMSO seulement est ajouté aux puits de contrôle positif (POS) et négatif (NEG) (colonnes 11 et 12, respectivement) d'une FlashPlate prétraitée. PARP-1 est diluée 1:40 dans du tampon (tampon B : 10 % de glycérol (v/v), 25 mM d'HEPES, 12,5 mM de MgCl₂, 50 mM de KCl, 1 mM de DTT, 0,01 % de NP-40 (v/v), pH 7,6) et 40 μL sont ajoutés à l'ensemble des 96 puits (la concentration finale de PARP-1 dans l'essai est d'environ 1 ng/μL). La plaque est scellée et agitée à température ambiante pendant 15 min. Ensuite, 10 μL de mélange de réaction positif (0,2 ng/μL d'oligonucléotide double brin [M3/M4] ADN par puits, 5 μM de concentration finale de NAD⁺ dans l'essai, et 0,075 μCi de ³H-NAD⁺ par puits) sont ajoutés aux puits appropriés (colonnes 1 à 11). Le mélange de réaction négatif, dépourvu de l'oligonucléotide ADN, est ajouté à la colonne 12 (la valeur moyenne du contrôle négatif étant utilisée comme arrière-plan). La plaque est à nouveau scellée et agitée pendant 60 min supplémentaires à température ambiante pour permettre à la réaction de se poursuivre. Ensuite, 50 μL d'acide acétique glacé (30 %) sont ajoutés à chaque puits pour arrêter la réaction, et la plaque est scellée et agitée pendant 60 min supplémentaires à température ambiante. Le signal tritié lié à la FlashPlate est ensuite déterminé en coups par minute (CPM) à l'aide du lecteur de plaque TopCount.

• Lignées cellulaires

  Breast cancer cell lines including SW620 colon, A2780 ovarian, HCC1937, Hs578T, MDA-MB-231, MDA-MB-436, and T47D

• Concentrations

  1-300 nM

• Temps dincubation

  7-14 days

• Méthode

  The cytotoxicity of Olaparib (AZD2281) is measured by clonogenic assay. It is dissolved in DMSO and diluted by culture media before use. The cells are seeded in six well plates and left to attach overnight. Then this compound is added at various concentrations and the cells are incubated for 7-14 days. After that the surviving colonies are counted for calculating the IC50.

• Modèles animaux

  Brca1^-/-;p53^-/- mammary tumors are generated in K14cre;Brca1^F/F;p53^F/F mice.

• Posologies

  50 mg/kg

• Administration

  Administered via i.p. injection at 10 μL/g of body weight