Ozanimod

Dans les cellules S1P1R-HEK293T, Ozanimod induit une internalisation et une dégradation soutenues du S1P1R. [1]

In vivo, Ozanimod présente une biodisponibilité orale et un volume de distribution élevés. Dans un modèle murin d'EAE induite par la MOG, ce composé (3 mg/kg, p.o.) supprime les symptômes cliniques. Dans un modèle de rat TNBS de maladie inflammatoire de l'intestin, il (1,2 mg/kg, p.o.) inhibe les scores cliniques et histologiques de la maladie. Dans un modèle de transfert adoptif de cellules T CD4+CD45Rbhi naïves, ce produit chimique (1,2 mg/kg, p.o.) a également réduit de manière significative la gravité de la maladie, évaluée en mesurant le degré d'inflammation, de perte glandulaire, d'hyperplasie, d'infiltration de neutrophiles et d'épaisseur de la muqueuse. [1]

• Essais pharmacologiques in vitro

  Les essais de signalisation cellulaire ont utilisé l'essai LiveBLAzer-FRET B/G pour détecter l'AMPc (S1P1R) ou la signalisation de la β-arrestine (S1P4R). Les essais sont réalisés dans des plaques à 384 puits en triple exemplaire selon les instructions du fabricant. Les stocks de composés sont conservés à 10 mM dans 100 % de DMSO à -80 °C, et initialement dilués au 1:10 avec 20 % de (2-hydroxypropyl)-β-cyclodextrine. Une courbe dose-réponse à 10 points est générée à 40 fois la concentration finale de l'essai dans 10 mM Hepes pH 7,4, contenant 0,1 % de Pluronic F-127. Pour l'essai S1P1R, 80 μM de forskoline sont inclus dans le diluant. En bref, 10⁴ cellules/puits sont incubées avec une dose-réponse de ligand à 37 °C pendant 4 heures. Le substrat CC4-AM et le probénécide sont ajoutés et incubés à 37 °C pendant 2 heures supplémentaires, puis analysés avec un SpectramaxM5. Pour les essais cAMP S1P1R, les données sont normalisées à la fluorescence maximale générée par 2 μM de forskoline. Pour les essais de liaison du GTPγS, 1 à 5 μg/puits de protéine membranaire sont incubés avec 10 μM de GDP, 100 à 500 μg/puits de billes SPA PVT d'agglutinine de germe de blé dans 50 mM HEPES, 100 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 20 μg/ml de saponine et 0,1 % de BSA sans acide gras pendant 15 minutes dans des plaques à 96 puits. Après l'ajout du composé et de 200 pM de GTP [35S] (1250 Ci/mmol), les plaques sont incubées pendant 120 minutes et centrifugées à 300 g pendant 5 minutes. La radioactivité est détectée avec un instrument TopCount. Toutes les données sont ajustées avec une régression non linéaire à quatre paramètres à pente variable (GraphPad Prism) pour générer la concentration efficace maximale (EC50) et l'efficacité maximale par rapport au S1P.

• Lignées cellulaires

  HEK293T cells

• Concentrations

  1 μM

• Temps dincubation

  1 h

• Méthode

  Cells expressing S1P1 receptors were incubated with vehicle control or 1 μM this compound for 1 h.

• Modèles animaux

  MOG-induced EAE model in C57Bl6 mice, TNBS model of inflammatory bowel disease in male Sprague Dawley rats, and Na飗e CD4+CD45Rbhi T cell adoptive transfer model in SCID mice

• Posologies

  0.1-3 mg/kg

• Administration

  p.o.