PF-06726304

N° de catalogueS8494 Lot :S849401

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Données techniques

Formule

C₂₂H₂₁Cl₂N₃O₃

Poids moléculaire

446.33

Numéro CAS

1616287-82-1

Solubilité (25°C)*

In vitro

Ethanol

22 mg/mL (49.29 mM)

DMSO

10 mg/mL (22.4 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

Le PF-06726304 est un inhibiteur sélectif de l'EZH2 avec des valeurs de Ki de 0,7 nM et 3 nM pour WT EZH2 et Y641N respectivement ; ce composé inhibe également l'H3K27me3 avec une valeur IC50 de 15 nM.

Cibles

Ezh2 (wild-type) (cell-free)	EZH2 Y641N (cell-free)
0.7 nM(Ki)	3 nM(Ki)

In vitro

PF-06726304 présente une inhibition biochimique très puissante de l'EZH2 ainsi qu'une bonne activité dans la réduction de H3K27Me3 dans les cellules et un effet antiprolifératif.

In vivo

PF-06726304 présente une activité robuste de croissance antitumorale in vivo et une dérépression dose-dépendante des gènes cibles de l'EZH2. Ce composé montre une bonne efficacité dans un modèle tumoral de lymphome diffus à grandes cellules B de Karpas-422 et a présenté des effets pharmacodynamiques ciblés in vivo.

Protocole (de référence)

Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires Karpas-422 cell line Concentrations -- Temps dincubation 72 h Méthode Karpas-422 cells are plated in complete cell culture medium (100 μL/well) in a 96-well clear, V bottom polystyrene cell culture plate at a density of 2500 cells/well. The cells are then incubated for 2−3 h at 37 °C and 5% CO2. Compound dilution plates are prepared in 96-well clear, U-bottom polypropylene plates in 100% DMSO at 10 mM stock concentration in duplicate wells using an 11-point serial dilution (1:3 dilutions). This compound is further diluted in growth medium, and 25 μL is added to each well of the cell plates. The highest this chemical concentration tested is 50 μM final, with a 0.5% final DMSO concentration. The plates are then incubated for 72 h at 37 °C and 5% CO2. At the end of the incubation period with this compound, the plates are centrifuged at 2000 rpm for 5 min at room temperature, and the medium is removed. Then 100 μL of acid-extracted solution is added to each well. The plates are shaken for 50 min at 4 °C to lyse the cells, and then 38 μL of neutralization buffer is added. The plates are then frozen at −80 °C. The next day, the plates are shaken at room temperature to thaw. Cell lysates (50 μL/well) are then transferred to ELISA plates. The plates are covered and incubated for 2.5 h at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are washed seven times (300 μL/well) with 1× wash buffer. Then 100 μL of biotinylated trimethylhistone H3K27 detection antibody is added to each well and incubated for 2 h at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are washed as described above. Horseradish peroxidase-linked antibody (100 μL) is added to each well and incubated for 60 min at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are washed. Finally, 100 μL of TMB substrate reagent is added to each well and incubated for 5 min at room temperature in the dark with slow shaking, after which 100 μL of stop solution is added to stop the reaction.
Étude animale :^{^[1]}	Modèles animaux Female Scid beige mice Posologies 30, 100, 300 mg/kg Administration oral

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
Karpas-422 cell line
Concentrations
--
Temps dincubation
72 h
Méthode
Karpas-422 cells are plated in complete cell culture medium (100 μL/well) in a 96-well clear, V bottom polystyrene cell culture plate at a density of 2500 cells/well. The cells are then incubated for 2−3 h at 37 °C and 5% CO2. Compound dilution plates are prepared in 96-well clear, U-bottom polypropylene plates in 100% DMSO at 10 mM stock concentration in duplicate wells using an 11-point serial dilution (1:3 dilutions). This compound is further diluted in growth medium, and 25 μL is added to each well of the cell plates. The highest this chemical concentration tested is 50 μM final, with a 0.5% final DMSO concentration. The plates are then incubated for 72 h at 37 °C and 5% CO2. At the end of the incubation period with this compound, the plates are centrifuged at 2000 rpm for 5 min at room temperature, and the medium is removed. Then 100 μL of acid-extracted solution is added to each well. The plates are shaken for 50 min at 4 °C to lyse the cells, and then 38 μL of neutralization buffer is added. The plates are then frozen at −80 °C. The next day, the plates are shaken at room temperature to thaw. Cell lysates (50 μL/well) are then transferred to ELISA plates. The plates are covered and incubated for 2.5 h at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are washed seven times (300 μL/well) with 1× wash buffer. Then 100 μL of biotinylated trimethylhistone H3K27 detection antibody is added to each well and incubated for 2 h at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are washed as described above. Horseradish peroxidase-linked antibody (100 μL) is added to each well and incubated for 60 min at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are washed. Finally, 100 μL of TMB substrate reagent is added to each well and incubated for 5 min at room temperature in the dark with slow shaking, after which 100 μL of stop solution is added to stop the reaction.

Étude animale :^{^[1]}

Modèles animaux
Female Scid beige mice
Posologies
30, 100, 300 mg/kg
Administration
oral

Références

http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acs.jmedchem.6b00515

Sellecks PF-06726304 A été cité par 3 Publications

Genetic and epigenetic characterization of sarcoma stem cells across subtypes identifies EZH2 as a therapeutic target [ NPJ Precis Oncol, 2025, 9(1):7]	PubMed: 39789291
Cathepsin-facilitated invasion of BMI1-high hepatocellular carcinoma cells drives bile duct tumor thrombi formation [ Nat Commun, 2023, 10.1038/s41467-023-42930-y]	PubMed: 37923799
Quantitative control of noise in mammalian gene expression by dynamic histone regulation [ Elife, 2021, 10e65654]	PubMed: 34379055

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