PHA-767491 HCl

N° de catalogueS2742 Lot :S274201

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Données techniques

Formule

C12H11N3O.HCl
Poids moléculaire 249.7 Numéro CAS 942425-68-5
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 24 mg/mL (96.11 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans l'ordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations d'un lot à l'autre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Le PHA-767491 (CAY10572, NMS 1116354) HCl est un puissant inhibiteur double Cdc7/CDK9, ATP-compétitif, avec des IC50 de 10 nM et 34 nM respectivement dans des essais acellulaires. Il présente une sélectivité d'environ 20 fois contre CDK1/2 et GSK3-β, une sélectivité de 50 fois contre MK2 et CDK5, une sélectivité de 100 fois contre PLK1 et CHK2.
Cibles
Cdc7
(Cell-free assay)		 CDK9
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 CDK2
(Cell-free assay)		 CDK1
(Cell-free assay)		 Voir plus
10 nM 34 nM 220 nM 240 nM 250 nM
In vitro

PHA-767491 displays approximately 20-fold selectivity for Cdk1, Cdk2 and GSK3-β, 50-fold selectivity for MK2 and Cdk5 and 100-fold selectivity for PLK1 and CHK2. PHA-767491 inhibits cell proliferation in a variety of human cell lines with IC50 of 0.86 μM for SF-268 to 5.87 μM for K562, and significantly induces apoptosis in a p53-independent manner in almost all cell lines in contrast with 5-FU  which only works in a few of cell lines. Unlike current DNA synthesis inhibitors, PHA-767491 treatment at 5 μM blocks the initiation of DNA replication but not replication fork progression, due to specific inhibition of Cdc7 kinase and Mcm2 phosphorylation at the Cdc7-dependent Ser40 site. The up-regulated Mcl-1 levels in ABT-737-resistant OCI-LY1 and SU-DHL-4 cells can be significantly decreased by PHA-767491 treatment at 3 μM possibly due to the inhibition of Cdk9, leading to the restoration of the sensitivity to ABT-737. The direct mitochondrial dependent pro-apoptosis effect of PHA-767491 is also observed when applied at 1 μM in quiescent chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells through the similar mechanism with EC50 of 0.34-0.97 μM. While in proliferating CLL cells stimulated by CD154 and interleukin-4, PHA-767491 treatment at 5 μM abolishes DNA synthesis by inhibiting Cdc7 rather than triggering cell death.

In vivo

Administration of PHA-767491 twice a day for 5 days significantly inhibits the growth of HL60 xenograft in a dose-dependent manner with TGI of 50% and 92% at dose of 20 mg/kg and 30 mg/kg, respectively, the effect of which is also marked in A2780, Mx-1, and HCT-116 xenograft models as well as the mammary carcinomas, and correlates with Cdc7 inhibition and subsequently decreased phosphorylation of Mcm2 at the Cdc7-dependent site Ser40

Caractéristiques Le premier inhibiteur qui affecte directement les mécanismes contrôlant l'initiation par opposition à l'élongation dans la réplication de l'ADN.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Tests kinases in vitro

    L'inhibition de Cdc7 et CDK9 par PHA-767491 (IC50) est déterminée à l'aide de l'essai basé sur l'échangeur d'anions fort (résine Dowex 1-X8, forme formate). Pour chaque enzyme, les valeurs Km absolues pour l'ATP et le substrat spécifique sont initialement déterminées, et chaque essai est ensuite réalisé à des concentrations optimisées d'ATP/33P-γ-ATP mix (2Km) et de substrat (5Km). L'essai kinase de Cdc7 est effectué dans un tampon contenant 50 mM Hepes pH 7,9, 15 mM MgCl2, 2 mM β-glycérophosphate, 0,2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP mix, 5Km Mcm2 (aa 10-294), 37 nM de Cdc7/Dbf4 recombinant et une concentration croissante de PHA-767491 dans un volume final de 30 μL, et incubé pendant 1 heure à 25 °C. L'essai kinase de CDK9 est effectué en utilisant 50 nM de Cdk9/cyclin T recombinant dans 50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP mix, 5Km peptide CDT d'ARN polymérase et une concentration croissante de PHA-767491 dans un volume final de 30 μL, et incubé pendant 1 heure à 25 °C. Après incubation, 150 μL de résine/formate (pH 3,0) sont ajoutés pour arrêter la réaction et capturer le 33P-γ-ATP non réagi, le séparant ainsi du substrat phosphorylé en solution. Après 1 heure de repos, un volume de 50 μL de surnageant est transféré dans des plaques à 96 puits Optiplate. Après l'ajout de 150 μL de Microscint 40, la radioactivité est comptée dans le TopCount.
Test cellulaire :

[1]
  • Lignées cellulaires

    HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, and NHDF

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 20 μM

  • Temps d'incubation

    24 or 72 hours

  • Méthode

    Cells are exposed to PHA-767491 for 24 or 72 hours. Cells are lysed and the ATP content in the well, used as a measure of viable cells, is determined using a thermostable firefly luciferase–based assay. Activation of caspase-3 and caspase-7 is measured as a ratio between treated sample and untreated control with a luciferase-based assay, containing a specific proluminescent substrate. DNA replication is measured as incorporation of nucleotide analog BrdU into DNA by flow cytometry.
Étude animale :

[1]
  • Modèles animaux

    Female SCID mice subcutaneously implanted with HL60 cells, male Hsd, athymic nu-nu mice subcutaneously implanted with HCT116 cells, A2780 or Mx-1 cells, and female Sprague-Dawley rats with mammary carcinomas

  • Posologies

    ~50 mg/kg

  • Administration

    Intravenous or oral administration twice a day

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20197552/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21768328/

Validation du produit par le client

<p>Viability at 250 nM and CI vs. Fa for U2932 following 24 hours exposure to ABT-199, additional drugs with activity against CDK9, or the combinations. Mean of quadruplicates ± SEM.</p>

, , Leukemia, 2015, 29(8):1702-12.

Selleck's PHA-767491 HCl A été cité par 49 Publications

ATR and TopBP1 oppose to control dormant origin activity and global replication dynamics, providing a first defense against replication stress [ Nucleic Acids Res, 2026, 54(7)gkag315] PubMed: 42011787
The DNA replication machinery transmits dual signals to prevent unscheduled licensing and execution of centrosome duplication [ Nat Commun, 2025, 16(1):7799] PubMed: 40921755
Combined therapy with DR5-targeting antibody-drug conjugate and CDK inhibitors as a strategy for advanced colorectal cancer [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00231-9] PubMed: 40449480
Proteomic discovery of DEK and NUMA1 as new players in UV-induced DNA damage repair mechanisms [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):547] PubMed: 41285742
p53-dependent crosstalk between DNA replication integrity and redox metabolism mediated through a NRF2-PARP1 axis [ Nucleic Acids Res, 2024, gkae811] PubMed: 39315696
ATR limits Rad18-mediated PCNA monoubiquitination to preserve replication fork and telomerase-independent telomere stability [ EMBO J, 2024, 43(7):1301-1324] PubMed: 38467834
Loss of POLE3-POLE4 unleashes replicative gap accumulation upon treatment with PARP inhibitors [ Cell Rep, 2024, 43(5):114205] PubMed: 38753485
Single-cell analysis reveals host S phase drives large T antigen expression during BK polyomavirus infection [ PLoS Pathog, 2024, 20(12):e1012663] PubMed: 39636788
Multiplex single-cell chemical genomics reveals the kinase dependence of the response to targeted therapy [ Cell Genom, 2024, 4(2):100487] PubMed: 38278156
K6-linked ubiquitylation marks formaldehyde-induced RNA-protein crosslinks for resolution [ Mol Cell, 2023, 10.1016/j.molcel.2023.10.011] PubMed: 37951215

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