Pomalidomide (CC-4047)

Le Pomalidomide inhibe la libération de TNF-alpha stimulée par le lipopolysaccharide (LPS) dans les PBMC humains et dans le sang total humain avec des valeurs IC50 de 13 nM et 25 nM, respectivement. [1] Ce composé inhibe la croissance des cellules T régulatrices stimulées par l'IL-2 avec un IC50 d'environ 1 μM. [2] Le traitement avec ce produit chimique (6,4 nM-10 μM) augmente la production d'IL-2 dans les cellules T du sang périphérique humain, et est légèrement plus puissant dans le sous-ensemble CD4+ que dans le sous-ensemble CD8+. Il est significativement plus puissant que le CC-5013 pour élever les niveaux d'IL-2, d'IL-5 et d'IL-10, mais seulement légèrement plus puissant que le CC-5013 pour élever les niveaux d'IFN-γ. Cet agent améliore l'activité transcriptionnelle AP-1 induite par les cellules SEE et Raji dans les cellules Jurkat de manière dose-dépendante, avec une amélioration maximale de 4 fois à 1 μM. [3] L'exposition des cellules Raji à diverses concentrations de ce composé (2,5-40 μg/mL) pendant 48 heures entraîne une diminution significative de la prolifération cellulaire et de la synthèse d'ADN. Il y a une réduction d'environ 40% par rapport aux contrôles traités par véhicule. [4]

Le Pomalidomide améliore l'effet antitumoral du rituximab contre les lymphomes à cellules B chez les souris immunodéficientes combinées sévères. L'administration de ce composé en combinaison avec le rituximab confère aux souris une période de survie médiane de 74 jours, contre 58 jours pour le traitement CC5013/rituximab et 45 jours pour la monothérapie par rituximab. L'effet synergique de ce composé et du rituximab peut être complètement abrogé par l'épuisement des cellules NK, ce qui soutient la proposition selon laquelle l'expansion des cellules NK est un mécanisme par lequel ce composé peut augmenter l'activité antitumorale du rituximab. [4]

• Inhibition de la synthèse de TNF-α

  L'activité inhibitrice de TNF-α est mesurée dans des PBMC stimulés par le lipopolysaccharide (LPS). Le Pomalidomide est ajouté aux PBMC humains 1 heure avant l'ajout de LPS (1 μg/mL) et l'incubation est poursuivie pendant 18 à 20 heures supplémentaires. Les surnageants sont ensuite récoltés, et la concentration de TNF-α dans les surnageants est déterminée par ELISA. La concentration de ce composé qui inhibe la production de TNF de 50 % (IC50) est calculée par analyse de régression non linéaire. Le test d'inhibition du TNF du sang total humain est réalisé de manière similaire au test sur PBMC, sauf que du sang total humain frais hépariné est directement plaqué dans des plaques de microtitration.

• Lignées cellulaires

  Raji, SU-DHL-4 and SU-DHL-10 cell lines

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations 2.5-40 μg/mL

• Temps dincubation

  24 or 48 hours

• Méthode

  For assessment of cell apoptosis, Lymphoma cell lines are exposed to Pomalidomide (5 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. The cells are stained with FITC-labeled Annexin V and propidium iodine. Cell apoptosis is analyzed by multicolor flow cytometric analysis using a fluorescence-activated cell sorter/FACStar Plus flow cytometer. Cells are scored as apoptotic if they are Annexin V–positive and propidium iodine–negative/positive (early and late apoptosis, respectively). For determination of cell proliferation, the Lymphoma cell lines are exposed to this compound (2.5, 5, 10, 20, and 40 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. 1 μCi per well (96-well plate) of [³H]-thymidine is added and cells are incubated for another 18 hours. Cells are then harvested using the Harvest system into the 96-well glass filters and [³H]-thymidine uptake is measured using an automated scintillation counter.

• Modèles animaux

  Disseminated lymphoma-bearing SCID mice

• Posologies

  0.5 mg/kg

• Administration

  Injection i.p.