PP2 (AGL 1879)

Le PP2 inhibe Src en se liant à une zone de la molécule qui ne chevauche pas le domaine de liaison à l'ATP. [2] Ce composé (20 μM) induit une inhibition de croissance de 40 à 50 % des cellules HT29, cette concentration réduit l'activité Src dès 1 heure et maintient une inhibition de 35 % de l'activité Src pendant 2 jours. Il (100 mM) diminue l'activité Src des cellules HT29 de manière dose-dépendante. Cette substance chimique (1 mM-100 mM) provoque une inhibition de croissance dose-dépendante des cellules humaines de cancer du côlon (HT29, SW480 et PMCO1), des cellules de cancer du foie (PLC/PRF/5, KYN-2, Li7 et HepG2) et des cellules de cancer du sein (MCF-7, MDA-MB-468 et BT-474). Il (20 μM) augmente significativement l'agrégation dans la plupart des cellules cancéreuses (HT29, SW480, PMCO1, PLC/PRF/5, KYN-2, Li7, MCF-7 et MDA-MB-468) de manière dépendante de la E-cadhérine. Ce composé (20 μM) améliore l'expression de la E-cadhérine et augmente également fortement l'association de la E-cadhérine avec le cytosquelette d'actine dans les cellules cancéreuses. Il (20 μM) augmente l'expression de l'α-caténine, de la β-caténine et de la γ-caténine dans les cellules HT29, tandis que dans les cellules PLC/PRF/5 et MCF-7, le niveau total de protéines d'α-caténine ne change pas, mais les niveaux de β-caténine et de γ-caténine augmentent légèrement. [3] Cet inhibiteur inhibe la prolifération de deux cellules de cancer du col de l'utérus (HeLa et SiHa) de manière dépendante du temps et de la dose. Il (10 μM) régule à la baisse les niveaux d'expression de pSrc-Y416, pEGFR-Y845 et -Y1173 dans les cellules HeLa et SiHa. Cette substance chimique (10 μM) pourrait moduler l'arrêt du cycle cellulaire en régulant à la hausse p21(Cip1) et p27(Kip1) dans les deux cellules HeLa et SiHa et en régulant à la baisse l'expression de la cycline A et de la kinase dépendante des cyclines-2, -4 (Cdk-2, -4) dans les cellules HeLa et de la cycline B et Cdk-2 dans les cellules SiHa. [4]

Le PP2 (5 mg/kg/jour) induit un certain ralentissement du taux de croissance des tumeurs primaires par rapport au contrôle traité avec le véhicule chez les souris SCID inoculées avec des cellules HT29 dans la rate. Ce composé induit un certain ralentissement du taux de croissance des tumeurs primaires par rapport au contrôle traité avec le véhicule chez les souris SCID inoculées avec des cellules HT29 dans la rate. Cette substance chimique réduit significativement le poids relatif du foie et le volume des métastases hépatiques par rapport aux contrôles chez les souris SCID inoculées avec des cellules HT29 dans la rate. [3] Les rats traités avec ce composé (1,5 mg/kg i.p.) montrent une réduction d'environ 50 % de la taille de l'infarctus sur l'IRM pondérée en T2 et dans la coloration TTC par rapport aux contrôles chez les rats atteints de lésion cérébrale ischémique focale. Cette substance chimique entraîne un meilleur score neurologique que les contrôles chez les rats atteints de lésion cérébrale ischémique focale. [5]

• Tests enzymatiques en complexe immun

  L'énolase traitée à l'acide est diluée 1:20 avec du PBS 1× avant d'être aliquoteée à 100 μL/puits dans une plaque d'essai Nunc à 96 puits à forte liaison protéique. Les puits d'essai sont ensuite aspirés ; bloqués avec 0,5 % de sérum bovin, 1× PBS pendant 1 h à 37 ℃ ; puis lavés cinq fois avec 300 μL de 1× PBS/puits. La source de Lck est soit des cellules LSTRA, soit du Lck exprimé dans des cellules HeLa à l'aide d'un système d'expression vaccinal. FynT est exprimé dans des cellules HeLa à l'aide du système vaccinal. Les cellules (12,5×10⁶/mL) sont lysées dans un tampon de lyse, et les lysats sont clarifiés par centrifugation à 14 000 tr/min pendant 15 min à 4 ℃ dans un tube Eppendorf. Les lysats clarifiés sont ensuite incubés avec l'anticorps anti-kinase approprié à 10 μg/mL pendant 2 h à 4 ℃. Des billes de Protéine A-Sépharose sont ajoutées au mélange anticorps/lysats à 250 μL/mL et laissées à incuber pendant 30 min à 4 ℃. Les billes sont ensuite lavées deux fois dans 1 mL de tampon de lyse et deux fois dans 1 mL de tampon kinase (25 mM HEPES, 3 mM MnCl₂, 5 mM MgCl₂ et 100 μM orthovanadate de sodium) et remises en suspension à 50 % (p/v) dans un tampon kinase. Vingt-cinq microlitres de la suspension de billes sont ajoutés à chaque puits de la plaque à 96 puits à forte liaison protéique recouverte d'énolase, ainsi qu'une concentration appropriée de ce composé et de [γ-³²P]ATP (25 μL/puits d'une solution à 200 μCi/mL dans un tampon kinase). Après incubation pendant 20 min à 20 ℃, 60 μL de tampon de solubilisation 2× bouillant contenant 10 mM d'ATP sont ajoutés aux puits d'essai pour arrêter les réactions. Trente microlitres des échantillons sont retirés des puits, bouillis pendant 5 min et soumis à une électrophorèse sur gel de SDS-polyacrylamide à 7,5 %. Les gels sont ensuite séchés et exposés à un film Kodak X-AR. Pour la quantification, les films sont scannés à l'aide d'un scanner laser Molecular Dynamics, et la densité optique de la bande de substrat majeure, l'énolase p46, est déterminée. Dans des expériences complémentaires pour mesurer l'activité de cette substance chimique contre Lck, la plaque d'essai est lavée avec deux cycles de lavage sur un récolteur Skatron en utilisant 50 mM d'EDTA, 1 mM d'ATP. Du liquide de scintillation (100 μL) est ensuite ajouté aux puits, et l'incorporation de ³²P est mesurée à l'aide d'un micro-β-compteur.

• Lignées cellulaires

  HT29, SW480, PMCO1, PLC/PRF/5, KYN-2, Li7, HepG2, MCF-7, MDA-MB-468 and BT-474 cell lines

• Concentrations

  ~100 μM

• Temps dincubation

  2 days

• Méthode

  Cell viability is determined using an in vitro toxicology assay kit following the manufacturer’s instructions. Cells are seeded in 96-well plates at day 0. Starting at day 1, cells are treated for 2 days with each of a series of increasing concentrations of PP2 (1 μM, 10 μM, and 100 μM). At the end of this period, cell proliferation is evaluated  by mitochondria dehydrogenase in viable cells, leading to formazan formation. This experiment is repeated three times with 10 determinations/tested concentration.

• Modèles animaux

  SCID mice inoculated HT29 cells in the spleen

• Posologies

  5 mg/kg/day

• Administration

  intraperitoneal injection