Refametinib (RDEA119)

N° de catalogueS1089 Lot :S108901

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Données techniques

Formule

C19H20F3IN2O5S
Poids moléculaire 572.34 Numéro CAS 923032-37-5
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (174.72 mM)
Ethanol 100 mg/mL (174.72 mM)
Water Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Refametinib (RDEA119, Bay 86-9766) est un inhibiteur puissant, non compétitif de l'ATP et hautement sélectif des MEK1 et MEK2 avec une IC50 de 19 nM et 47 nM, respectivement.
Cibles
MEK1
(Cell-free assay)		 MEK2
(Cell-free assay)
19 nM 47 nM
In vitro Refametinib (RDEA119) se lie sélectivement et directement à une poche allostérique des enzymes MEK1/2, et est très efficace pour inhiber la prolifération cellulaire dans plusieurs lignées de cellules tumorales, y compris A375, SK-MEI-28, Colo205, HT-29 et BxPC3. Il inhibe la croissance dépendante de l'ancrage de lignées de cellules cancéreuses humaines abritant la mutation V600E BRAF avec gain de fonction, avec des valeurs de GI50 allant de 67 à 89 nM. Dans des conditions indépendantes de l'ancrage, les valeurs de GI50 pour toutes les lignées cellulaires testées sont similaires (40-84 nM). Ce composé montre une sélectivité tissulaire qui réduit son potentiel d'effets secondaires liés au système nerveux central. Il inhibe puissamment la prolifération des 4 lignées cellulaires qui abritaient la mutation BRAF, mais a des effets nuls ou modestes sur les 4 autres cellules qui abritaient le BRAF de type sauvage (IC50 de 0,034-0,217 μM contre 1,413-34,120 μM). L'effet inhibiteur de Refametinib dans les lignées cellulaires sélectionnées OCUT1 (BRAF V600E(+), PIK3CA H1047R(+)) et SW1376 (BRAF V600E(+)) est amélioré par la combinaison avec l'inhibiteur de mTOR, le temsirolimus. Le Refametinib et le temsirolimus montrent également des effets synergiques sur la mort autophagique des cellules OCUT1 et KAT18 testées sélectivement.
In vivo L'administration orale de RDEA119 à 50 mg/kg selon un schéma quotidien unique × 14 conduit à une inhibition de 68 % de la croissance tumorale (TGI) dans le modèle tumoral de mélanome humain A375. Ce composé à 25 mg/kg selon un schéma quotidien unique × 14 entraîne une TGI de 123 % dans le modèle tumoral de carcinome colorectal humain Colo205 (une TGI > 100 % se produit lorsque la tumeur rétrécit en dessous de son volume initial). Une dose de 25 mg/kg une fois par jour × 14 produit une TGI de 56 % et 67 % pour les tumeurs HT-29 et A431, respectivement.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Essai kinase MEK

    La kinase ERK2 murine (mERK2) K52A/T183A inactive est purifiée par affinité à partir d'Escherichia coli exprimée à l'aide du vecteur pET21a. L'activité de la MEK1 kinase est déterminée en utilisant mERK2 K52A T183A comme substrat. L'enzyme MEK1 recombinante (5 nM) est d'abord activée par 0,02 unité ou 1,5 nM de RAF1 en présence de 25 mM HEPES (pH 7,8), 1 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0,2 mM EDTA et 50 μM ATP pendant 30 minutes à 25 °C. Les réactions sont initiées par l'ajout de 2 μM de mERK2K52A T183A et 2,5 μCi [γ-33P] ATP dans un volume total de 20 μL. L'activité de la MEK2 kinase est déterminée de manière similaire, sauf que l'activation par RAF1 n'est pas nécessaire et que 11 nM d'enzyme MEK2 (active) sont utilisés dans les essais. Le profilage des kinases pour Refametinib (RDEA119) est réalisé par Invitrogen en utilisant leur service Select Screen Kinase Profiling. L'essai biochimique Z'-LYTE est utilisé. Ce composé est testé en quadruplicata à 10 μM contre 205 kinases.
Test cellulaire :

[1]
  • Lignées cellulaires

    A375, SK-MEI-28, Colo205, HT-29 and BxPC3 cells

  • Concentrations

    10-1000 nM

  • Temps dincubation

    48 hours

  • Méthode

    For anchorage-dependent growth inhibition experiments, cells are plated in white 384-well plates at 1,000/20 μL/well or white 96-well microplates at 4,000/100 μL/well. After 24-h incubation at 37 °C, 5% CO2, and 100% humidity, Refametinib (RDEA119) is incubated for 48 hours at 37 °C and assayed using CellTiter-Glo. For the 96-well anchorage-independent growth assay, wells of an “ultralow binding” plate (Corning) are filled with 60 μL of a 0.15% agarose solution in complete RPMI 1640. Then, 60 μL of complete RPMI 1640 containing 9,000 cells in 0.15% agarose are added per well. After 24 hour, 60 μL of a 3 × drug solution in agarose-free complete RPMI 1640 are added. After 7 d, 36 μL of 6 × 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)- 2H-tetrazolium, inner salt reagent are added per well. After 2 hours at 37 °C, absorbance at 490 nm is determined on the M5 plate reader.
Étude animale :

[1]
  • Modèles animaux

    Female athymic nude mice are injected s.c. with A375, HT-29 and A431 tumor; male athymic nude mice with Colo205 tumor.

  • Posologies

    25 or 50 mg/kg

  • Administration

    Orally once daily for 14 days

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19706763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21351275/

Validation du produit par le client

RDEA119 (1 µM) or JTP-74057 (0.1 µM) abolished the effects of G1 on DAPK1 and NR2B phosphorylation.

Données de [ , , J Neurosci, 2012, 32(14): 4887-900 ]

Western blot analyses of downstream effector proteins of the MAPK signaling pathway. The panel of CRC cell lines was treated with or without refametinib (1 lM) for 72 h. a-Tubulin served as a loading control.

Données de [ , , Mol Oncol, 2018, 12(8):1398-1409 ]

B: ERK and p-ERK1/2 levels in response to MEKi treatment. Tra = trametinib, Ref = refametinib, Sel = selumetinib, Bin = binimetinib. Films were intentionally overexposed to detect signal in lanes with low p-ERK1/2 expression. For each cell line all treatment conditions were performed as part of the same experiment. All experimental findings were confirmed in independent experiments performed in triplicate. Note: membranes incubated with p-ERK1/2 antibody were overexposed to capture all remaining signal after MEKi treatment. WB images have been cut to keep the same sample order. All membranes incubated with the same antibody have been exposed for the same period of time.

Données de [ , , Am J Cancer Res, 2016, 6(10):2235-2251 ]

MEK inhibition of hypoosmolar-induced ADM. In all panels KrasG12D acinar explants were isolated and starved overnight. The next day explants were incubated with hypoosmotic (150 mOsm) medium for 5 min and then refametinib was added at the indicated concentrations. (A) HRP assay from two mice was performed immediately after the 5 min hypoosmotic treatment. Mean ± SD, two-tailed t-test. (B) Acinar explants were seeded in collagen and ADM was quantified at day 4. N = number of mice. Mean ± SD, two-tailed t-test. (C) Representative bright field images of acinar explants described in B. Dashed lines highlight acinar cell clusters, arrowheads: duct-like structures. Scale bars = 50 μm.

Données de [ , , EBioMedicine, 2017, 15:90-99 ]

Sellecks Refametinib (RDEA119) A été cité par 29 Publications

System analysis links SMARCD3 regulons to growth signaling and MEK inhibitor response in everolimus-resistant ER+ breast cancer cells [ Cell Rep Med, 2025, 6(11):102425] PubMed: 41260207
Histone deacetylase inhibitors promote breast cancer metastasis by elevating NEDD9 expression [ Signal Transduct Target Ther, 2023, 8(1):11] PubMed: 36604412
Salmonella effector SopB reorganizes cytoskeletal vimentin to maintain replication vacuoles for efficient infection [ Nat Commun, 2023, 14(1):478] PubMed: 36717589
Signaling-induced systematic repression of miRNAs uncovers cancer vulnerabilities and targeted therapy sensitivity [ Cell Rep Med, 2023, S2666-3791(23)00367-1] PubMed: 37734378
Signaling-induced systematic repression of miRNAs uncovers cancer vulnerabilities and targeted therapy sensitivity [ Cell Rep Med, 2023, 4(10):101200] PubMed: 37734378
Protein Tyrosine Phosphatase Non-Receptor 11 (PTPN11/Shp2) as a Driver Oncogene and a Novel Therapeutic Target in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) [ Int J Mol Sci, 2023, 24(13)10545] PubMed: 37445722
Anatomic position determines oncogenic specificity in melanoma [ Nature, 2022, 604(7905):354-361] PubMed: 35355015
NOTCH signaling limits the response of Low Grade Serous Ovarian Cancers to MEK inhibition [ Mol Cancer Ther, 2022, MCT-22-0004] PubMed: 36198031
Secondary resistance to anti-EGFR therapy by transcriptional reprogramming in patient-derived colorectal cancer models [ Genome Med, 2021, 13(1):116] PubMed: 34271981
Targeting the PI3K and MAPK pathways to improve response to HER2-targeted therapies in HER2-positive gastric cancer [ J Transl Med, 2021, 19(1):184] PubMed: 33933113

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