RKI-1447

N° de catalogueS7195 Lot :S719501

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Données techniques

Formule

C16H14N4O2S
Poids moléculaire 326.37 Numéro CAS 1342278-01-6
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 65 mg/mL (199.16 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension
15% Captisol

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, take 10 mg of this product, add it to 1 ml of 15% Captisol clear solution, and mix evenly to form a uniform suspension. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 200 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

 0.250mg/ml (0.77mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description RKI-1447 est un puissant inhibiteur de ROCK1 et ROCK2, avec une IC50 de 14,5 nM et 6,2 nM, respectivement, et possède des activités anti-invasives et antitumorales.
Cibles
ROCK2
(Cell-free assay)		 ROCK1
(Cell-free assay)
6.2 nM 14.5 nM
In vitro

RKI-1447 est une pyridylthiazolyl-urée perméable aux cellules qui agit comme un puissant inhibiteur de Rho Kinase ciblant le site ATP, montrant une puissance beaucoup plus réduite contre PKA, PKN1/PRK1, p70S6K/RPS6kB1, AKT1, MRCKa/CDC42BPA (85,5 %, 80,5 %, 61,9 %, 56,0 % et 50,4 % d'inhibition, respectivement, par 1 µM de ce composé) ou 15 autres kinases. Les structures cristallines du complexe de cette substance chimique/ROCK1 révèlent que cet inhibiteur est un inhibiteur de kinase de Type I qui se lie au site de liaison de l'ATP par des interactions avec la région de la charnière et le motif DFG. Il supprime la phosphorylation des substrats de ROCK MLC-2 et MYPT-1 dans les cellules cancéreuses humaines, mais n'a eu aucun effet sur les niveaux de phosphorylation des kinases AKT, MEK et S6 à des concentrations aussi élevées que 10 μM. Ce composé est également très sélectif pour l'inhibition de la réorganisation du cytosquelette médiée par ROCK (formation de fibres de stress d'actine) après stimulation par LPA, mais n'affecte pas la formation de lamellipodes et de filopodes médiée par PAK après stimulation par PDGF et Bradykinine. Il inhibe la migration, l'invasion et la croissance tumorale indépendante de l'ancrage des cellules cancéreuses du sein.

In vivo

RKI-1447 est très efficace pour inhiber la croissance des tumeurs mammaires dans un modèle de souris transgénique. Les tumeurs des souris traitées avec ce composé ont augmenté en taille avec un pourcentage moyen de changement de volume tumoral de seulement 8,8 %. Ainsi, il a inhibé la croissance des tumeurs mammaires de 87 %, et en moyenne, les tumeurs mammaires des souris traitées avec cette substance chimique étaient 7,7 fois plus petites que celles des tumeurs des souris traitées avec le véhicule témoin. Les traitements avec ce composé n'ont pas entraîné de perte de poids chez la souris.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[2]
  • Essai kinase Z-Lyte FRET

    L'inhibition de la kinase est mesurée à l'aide de l'essai kinase Z-Lyte® FRET d'Invitrogen avec le substrat peptidique Ser/Thr 13 basé sur la séquence de la chaîne légère de la myosine KKRPQRRYSNVF. Ce composé est testé sur trois jours distincts avec 8 dilutions en points réalisées en double pour déterminer les valeurs IC50 moyennes. Les conditions de l'essai sont optimisées à 15 μL de volume de réaction de la kinase avec 5 ng d'enzyme dans 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA et 0,01 % Brij-35. La réaction est incubée pendant 1 h à température ambiante en présence de 1,5 μM de substrat peptidique avec 12,5 μM d'ATP (pour ROCK1) ou 2 μM de substrat avec 50 μM d'ATP (pour ROCK2).
Test cellulaire :

[1]
  • Lignées cellulaires

    MDA-MB-231

  • Concentrations

    ~600 μM

  • Temps dincubation

    72 h

  • Méthode

    Cells are plated in a 96 well tissue culture plate (1200 cells per well) and incubated for 24 hours. After incubation the cells are treated with vehicle or increasing concentrations of RKI-1447 for 72 hours. After incubation, freshly prepared MTT (2mg/ml) is added to each well and incubated for 3 hours. After incubation the plates are read at 540 nm.
Étude animale :

[1]
  • Modèles animaux

    MMTV/neu transgenic mice [FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J]

  • Posologies

    200 mpk/day

  • Administration

    i.p.

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22846914/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23275831/

Validation du produit par le client

(d) ROCK inhibition blocks CC-RCC migration in a transwell assay. RCC10 or 786-O cells were treated with Y-27632, RKI 1447 or DMSO vehicle (as indicated) for 6 h. The assay was performed in duplicate and the experiment was repeated three times. Statistical analysis in (b-d) was performed using a paired t-test comparing each normalized dose to the negative control (*P<0.05, **P<0.01 and ***P<0.001); s.e.m.

Données de [ , , Oncogene, 2016, 1-10. ]

Western blotting analysis of the indicated proteins in MSC-4H-FC cells treated with increasing concentrations of dasatinib, PF-573228, or RKI-1447 for 24 hours. β-Actin levels were used as loading control.

Données de [ , , Neoplasia, 2018, 20(1):44-56 ]

The cells were treated with 5 μM of the PAK1-specific inhibitor IPA-3 or 1 μM of the ROCK1/2-specific inhibitor RKI-1447 for 24 h. Total cell lysates were immunoblotted with antibodies against p110β, p110δ, p-PAK1, PAK1, ROCK1, ROCK2, p-LIMK1, LIMK1 or β-actin, which served as an internal control. The results are representative of three independent experiments.

Données de [ , , Anticancer Res, 2017, 37(4):1805-1818 ]

Sellecks RKI-1447 A été cité par 12 Publications

Therapeutic targeting of tumor spheroids in a 3D microphysiological renal cell carcinoma-on-a-chip system [ Neoplasia, 2023, 10.1016/j.neo.2023.100948] PubMed: 37944353
Correlating Basal Gene Expression across Chemical Sensitivity Data to Screen for Novel Synergistic Interactors of HDAC Inhibitors in Pancreatic Carcinoma [ Pharmaceuticals (Basel), 2023, 16(2)294] PubMed: 37259439
Establishment and characterization of immortalized sweat gland myoepithelial cells [ Sci Rep, 2022, 12(1):7] PubMed: 34997030
İnsan kornea endotel hücreleri üzerine farklı RHO kinaz inhibitörlerinin etkinliğinin araştırılması [ GCRIS, 2022, ] PubMed: none
Synapse-specific Lrp4 mRNA enrichment requires Lrp4/MuSK signaling, muscle activity and Wnt non-canonical pathway [ Cell Biosci, 2021, 11(1):105] PubMed: 34090516
RKI-1447 suppresses colorectal carcinoma cell growth via disrupting cellular bioenergetics and mitochondrial dynamics. [ J Cell Physiol, 2020, 235(1):254-266] PubMed: 31237697
A novel human colon signet-ring cell carcinoma organoid line: establishment, characterization and application [ Carcinogenesis, 2020, 41(7):993-1004] PubMed: 31740922
[ Cell Rep, 2019, ] PubMed: 31825822
FUS-CHOP Promotes Invasion in Myxoid Liposarcoma through a SRC/FAK/RHO/ROCK-Dependent Pathway [Tornin J Neoplasia, 2018, 20(1):44-56] PubMed: 29190494
Prominent oncogenic roles of EVI1 in breast carcinoma [Wang H Cancer Res, 2017, 77(8):2148-2160] PubMed: 28209621

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