Ro-3306

RO-3306 inhibe l'activité de CDK1/cyclin B1, CDK1/cyclin A, CDK2/cyclin E et CDK4/cyclin D avec un Ki de 35 nM, 110 nM, 340 nM et plus de 2000 nM, respectivement. Le traitement des cellules HCT116, SW480 et HeLa avec RO-3306 pendant 20 h conduit à un blocage complet du cycle cellulaire en phase G2/M. La prolifération des HCT116 et SW480 est efficacement bloquée par RO-3306. RO-3306 semble être plus pro-apoptotique dans les cellules cancéreuses (HCT116 et SW480) que dans les cellules non tumorigènes (MCF 10A et MCF 12A).[1]

RO-3306 arrête efficacement la maturation des ovocytes à une concentration de 10 μM.[2]

RO-3306 est un inhibiteur CDK1 ATP-compétitif et sélectif.

• Test CDK

  L'activité de CDK1 cycline B1, CDK1 cycline A, CDK2 cycline E et CDK4 cycline D est mesurée par un dosage de fluorescence résolue en temps homogène dans un format à 96 puits. Le tampon de dosage contenait 25 mM Hepes, 6,25 mM MgCl2, 0,003 % Tween 20, 0,3 mg/mL BSA, 1,5 mM DTT et de l'ATP comme suit : 162 μM (CDK1), 90 mM (CDK2) ou 135 μM (CDK4). Le tampon CDK1 et CDK2 contenait 10 mM MgCl2. Les composés à tester sont dilués dans le tampon de dosage à 3 fois leur concentration finale dans 20 μL, et la réaction est démarrée par l'ajout d'un tampon de dosage de 40 μL contenant le substrat pRB (0,185 μM). Les plaques sont incubées à 37°C pendant 30 min sous agitation constante, et la réaction est terminée par l'ajout de 15 μL d'anticorps anti-phospho pRB (Ser-780) à 1,6 μM dans 25 mM Hepes, 24 mM EDTA et 0,2 mg/mL BSA. Après une incubation supplémentaire de 30 min sous agitation, 15 μL de 3 nM Lance-Eu-W1024-labeledanti-rabbitIgG et 60 nM d'anticorps anti-His-6 conjugué à l'allophycocyanine dans 25 mM Hepes et 0,5 mg/mL BSA sont ajoutés et incubés pendant 1 h. Les plaques sont lues dans le lecteur multi-étiquettes Victor-V à une excitation de 340 nm et une émission de 615 nm et 665 nm. Les valeurs IC50 sont calculées à partir des lectures à 665 nm et normalisées pour les lectures d'Europium à 615 nm. Les valeurs Ki sont calculées selon l'équation : Ki= IC50/(1 + S/Km ), où S est la concentration d'ATP dans le dosage et Km est la constante de Michaelis-Menten pour l'ATP. L'activité inhibitrice contre le panel de kinases est déterminée par la technologie de dosage IMAP.

• Lignées cellulaires

  MDA-MB-231 cell line

• Concentrations

  20 μM

• Temps dincubation

  72 h

• Méthode

  Log phases cells (25,000) are seeed in 96-well plates and incubated in a 37℃ incubator with CO2, After 24 h, different concentrations of RO-3306 are administered to determine the drug concentrations required to achieve a 50% growth inhibition (IC50). MTT (20 μL, 5mg/mL stock solution in saline) is added to each well and the cells are incubated for 4 h. Supernatants are removed and formazan crystals from viable cells are solubilized with 200 μL anhydrous DMSO. The absorbance is detected with a 550 model microplate reader at the 565 nm wavelength.

• Modèles animaux

  Female BALB/c mice

• Posologies

  1.5 mg/kg

• Administration

  i.n.