Ruxolitinib (INCB18424) Phosphate

L'INCB018424 inhibe puissamment et sélectivement la signalisation et la prolifération médiées par JAK2V617F dans les cellules Ba/F3 et les cellules HEL. L'INCB018424 augmente de manière marquée l'apoptose de manière dose-dépendante dans les cellules Ba/F3. L'INCB018424 (64 nM) entraîne un doublement des cellules avec des mitochondries dépolarisées dans les cellules Ba/F3. L'INCB018424 inhibe la prolifération des progéniteurs érythroïdes de donneurs normaux et de patients atteints de polyglobulie de Vaquez avec des IC50 de 407 nM et 223 nM, respectivement. L'INCB018424 démontre une puissance remarquable contre la formation de colonies érythroïdes avec une IC50 de 67 nM. [1]

L'INCB018424 (180 mg/kg, par voie orale, deux fois par jour) entraîne un taux de survie supérieur à 90 % au jour 22 dans un modèle de souris entraîné par JAK2V617F. L'INCB018424 (180 mg/kg, par voie orale, deux fois par jour) réduit de manière marquée la splénomégalie et les niveaux circulants de cytokines inflammatoires, et élimine préférentiellement les cellules néoplasiques, ce qui entraîne une survie significativement prolongée sans effets myélosuppresseurs ou immunosuppresseurs dans un modèle de souris entraîné par JAK2V617F. [1] Le critère d'évaluation principal est atteint chez 41,9 % des patients du groupe Ruxolitinib, contre 0,7 % dans le groupe placebo, dans l'essai en double aveugle sur la myélofibrose. Le Ruxolitinib permet de maintenir la réduction du volume de la rate et une amélioration de 50 % ou plus du score total des symptômes. [2] Un total de 28 % des patients du groupe Ruxolitinib (15 mg deux fois par jour) présentent au moins une réduction de 35 % du volume de la rate à la semaine 48 chez les patients atteints de myélofibrose, contre 0 % dans le groupe recevant la meilleure thérapie disponible. La longueur moyenne palpable de la rate a diminué de 56 % avec le Ruxolitinib, mais a augmenté de 4 % avec la meilleure thérapie disponible à la semaine 48. Les patients du groupe ruxolitinib ont montré une amélioration des mesures générales de la qualité de vie et une réduction des symptômes associés à la myélofibrose. [3]

• Test de liaison

  Les protéines recombinantes sont exprimées à l'aide de cellules Sf21 et de vecteurs baculoviraux et purifiées par chromatographie d'affinité. Les essais de kinase JAK utilisent un essai de fluorescence homogène résolu dans le temps avec le substrat peptidique (-EQEDEPEGDYFEWLE). Chaque réaction enzymatique est réalisée avec du Ruxolitinib ou un contrôle, une enzyme JAK, 500 nM de peptide, de l'adénosine triphosphate (ATP ; 1 mM) et 2 % de diméthylsulfoxyde (DMSO) pendant 1 heure. La concentration inhibitrice à 50 % (IC50) est calculée comme la concentration d'INCB018424 requise pour l'inhibition de 50 % du signal fluorescent.

• Lignées cellulaires

  Ba/F3 and HEL cells

• Concentrations

  3 μM

• Temps dincubation

  48 h

• Méthode

  Cells are seeded at 2 × 10³/well of white bottom 96-well plates, treated with INCB018424 from DMSO stocks (0.2% final DMSO concentration), and incubated for 48 hours at 37 ℃ with 5% CO₂. Viability is measured by cellular ATP determination using the Cell-Titer Glo luciferase reagent or viable cell counting. Values are transformed to percent inhibition relative to vehicle control, and IC50 curves are fitted according to nonlinear regression analysis of the data using PRISM GraphPad.

• Modèles animaux

  JAK2V617F-driven mouse model

• Posologies

  180 mg/kg

• Administration

  o.g.