SB415286

Le SB 415286 inhibe la GSK3α de manière compétitive avec l'ATP, avec un K_i de 31 nM et montre une puissance similaire contre la GSK3β. Ce composé a peu ou pas d'activité contre 24 autres protéine kinases avec une IC50 > 10 μM. Il stimule la synthèse du glycogène dans la lignée cellulaire hépatique humaine Chang avec un EC50 de 2,9 μM et induit l'expression d'un gène rapporteur régulé par la β-caténine-LEF/TCF dans les cellules HEK293. [1] Il protège les neurones du système nerveux central et périphérique en culture contre la mort induite par une activité réduite de la voie PI3-kinase de manière concentration-dépendante, ce qui est corrélé à l'inhibition de l'activité GSK-3 et à la modulation des substrats de la GSK-3, tau et β-caténine. [2] Dans les myotubes L6, ce produit chimique induit une activation beaucoup plus importante de la GS (6,8 fois) par rapport à celle provoquée par l'insuline (4,2 fois) ou le Li (4 fois). [3] Ce composé (10 μM) inhibe la régulation négative de la cycline D1 induite par la rapamycine et bloque la rapamycine et l'apoptose induite, suggérant un rôle critique de la GSK3β dans la sensibilisation médiatisée par la rapamycine. [4] Il prévient la mort cellulaire induite par le coxsackievirus de manière dose-dépendante via la stabilisation de la β-caténine. [5] Ce produit chimique exerce un effet protecteur sur la mort cellulaire induite par le peroxyde d'hydrogène dans les cellules de neuroblastome de rat B65 et les neurones, tandis que le lithium n'atténue pas les effets toxiques du peroxyde d'hydrogène. [7] Son traitement potentialise l'apoptose induite par TRAIL et CH-11 dans les cellules HepG2. [8] L'inhibition de la GSK-3 par ce composé provoque l'arrêt de la croissance des cellules de myélome multiple (MM) et l'apoptose par l'activation de la voie intrinsèque. [9] Il diminue la viabilité des cellules Neuro-2A et induit l'accumulation de cellules dans la phase G2/M du cycle cellulaire et l'apoptose subséquente. [10]

L'administration de SB 415286 (~10 mg/kg deux fois par jour) réduit l'étendue et le degré de l'inflammation colique provoquée par l'acide trinitrobenzène sulfonique (TNBS) chez le rat et réduit la perte de poids corporel, ce qui est lié à la régulation négative de l'activité NF-κB, impliquée dans la génération de médiateurs pro-inflammatoires. [6] Le traitement avec ce composé à 1 mg/kg retarde significativement la croissance des cellules Neuro-2A in vivo chez les souris nues. [10]

• dosage de l'activité de GSK-3

  L'activité kinase de GSK-3 est mesurée, en présence de diverses concentrations de SB 415286, dans un mélange réactionnel contenant les concentrations finales suivantes : 1 nM de GSK3α humaine ou de GSK3α de lapin ; 50 mM de MOPS pH 7,0 ; 0,2 mM d'EDTA ; 10 mM d'acétate de Mg ; 7,5 mM de L-mercaptoéthanol ; 5 % (p/v) de glycérol ; 0,01 % (p/v) de Tween-20 ; 10 % (v/v) de DMSO ; 28 μM de substrat peptidique GS-2. La séquence peptidique GS-2 correspond à une région de la glycogène synthase qui est phosphorylée par GSK-3. Le dosage est initié par l'ajout de 0,34 μCi de [³³P]γ-ATP (déterminations de l'IC50) ou de 2,7 μCi de [³³P]γ-ATP (déterminations du Ki). La concentration totale d'ATP est de 10 μM (déterminations de l'IC50) ou varie de 0 à 45 μM (déterminations du Ki). Après 30 minutes d'incubation à température ambiante, le dosage est arrêté par l'ajout d'un tiers du volume du dosage de 2,5 % (v/v) de H₃PO₄ contenant 21 mM d'ATP. Les échantillons sont déposés sur des tapis de phosphocellulose P30 et ceux-ci sont lavés six fois dans 0,5 % (v/v) de H₃PO₄. Les tapis filtrants sont scellés dans des sacs d'échantillons contenant du liquide de scintillation Wallac betaplate. L'incorporation de 33P dans le peptide substrat est déterminée par comptage des tapis dans un compteur de scintillation Wallac microbeta.

• Lignées cellulaires

  OPM-2, RPMI-8226, U-266, and INA-6

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Temps dincubation

  48, or 72 hours

• Méthode

  Cells are exposed to different concentrations of SB 415286 for 48 or 72 hours in 96-flat well plates. After 48 or 72 hours, [³H]thymidine is added to the cultures (10 μCi/well) for the last 12 hours. The [³H]thymidine incorporation is evaluated by scintillation counting by using a top count β-counter. Apoptosis is assessed by annexin V/Propidium Iodide staining or by detection of mitochondrial membrane potential. Cell death is evaluated by the analysis of Forward/Side scatter fluorescence changes. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) analysis is performed using a FACS-Calibur Cell Cytometer.

• Modèles animaux

  Male Wistar rats with acute colitis provoked by trinitrobenzene sulphonic acid (TNBS)

• Posologies

  ~1 mg/kg

• Administration

  Administered subcutaneously twice daily