SC79

SC79 supprime la translocation de la membrane plasmique de PH_AKTM-GFP et améliore la phosphorylation des trois isoformes d'Akt dans les cellules HEK293, HeLa, HL60, NB4 et HsSulton (cellules B). Ce composé réduit l'excitotoxicité neuronale et prévient la mort neuronale induite par un accident vasculaire cérébral. [1] Il restaure la prolifération des cellules dont le gène BRAT1 est inactivé et réduit la production de superoxyde dans les mitochondries des cellules positives au MitoSox. [2]

Dans le modèle murin d'ischémie cérébrale focale permanente, SC79 (0,04 mg/g, i.p.) permet l'activation cytosolique d'Akt et récapitule la fonction cellulaire primaire de la signalisation d'Akt, entraînant une survie neuronale accrue. [1]

• Phosphorylation cytosolique d'Akt

  Les cellules Hela sont privées de sérum pendant 1 heure et traitées avec de l'IGF (100 ng/mL) ou du SC79 (4 μg/mL) pendant 30 minutes. Les cellules sont lysées dans un tampon de lyse contenant 250 mM de saccharose, 20 mM de HEPES, 10 mM de KCl, 1,5 mM de MgCl₂, 1 mM d'EDTA, 1 mM d'EGTA, complété par des inhibiteurs de protéase. Les cellules sont passées plusieurs fois à travers une aiguille 25G et conservées sur glace pendant 20 minutes. Le lysat cellulaire total est prélevé à ce stade. Les lysats cellulaires sont centrifugés à 100 000 g pendant 30 minutes. Le surnageant est recueilli comme fraction cytosolique. Le culot est lavé avec le tampon de lyse et représente la fraction membranaire. Le lysat cellulaire total, les fractions cytosolique et membranaire sont résolus par SDS-PAGE et analysés pour la phospho-Akt (S473), l'Akt totale, la Tubuline (marqueur cytosolique) et l'Orai1 (marqueur membranaire) par western blot.

• Lignées cellulaires

  HsSultan and NB4 cells

• Concentrations

  8 μg/mL

• Temps dincubation

  24 h

• Méthode

  HsSultan or NB4 cells (2.5 × 10⁵) are plated in a 24-well plate in 500 μL of phenol red-free RPMI medium supplemented with 10% FBS. After incubation for 24 hours, each compound (8 µg/mL) is added and cultured for overnight (16–20 h). Fifty microliters of MTT solution (5 mg/mL in PBS) are added to each well. Following 2 hrs incubation, the purple formazan crystals are dissolved by directly adding in 500 μL of isopropanol with 0.1 M HCl to each well. After clearing the cell debris by centrifugation, the absorbance is measured at a wavelength of 570 nm.

• Modèles animaux

  Permanent focal cerebral ischemia mouse model

• Posologies

  0.04 mg/g

• Administration

  i.p.