MK-8776 (SCH 900776)

MK-8776 (SCH 900776) est un inhibiteur moins puissant de Chk2 et CDK2 avec des IC50 de 1,5 μM et 0,16 μM, respectivement. Il ne montre aucune inhibition significative des isoformes microsomales hépatiques humaines du cytochrome P450 1A2, 2C9, 2C19, 2D6 et 3A4. En combinaison avec un antimétabolite, ce composé induit une accumulation de γ-H2AX en 2 heures, ce qui est indicatif d'un effondrement de la fourche de réplication et de cassures de l'ADN double brin. De plus, il supprime l'accumulation de l'autophosphorylation de Chk1 pS296 de manière dose-dépendante. L'exposition de cellules WS1 en prolifération à SCH 900776 est associée à une accumulation rapide et dose-dépendante de Chk1 pS345, indiquant que les populations cycliques de cellules normales induisent Chk1 pS345 après exposition à celui-ci dans le cadre d'un cycle futile, peut-être entraîné par les kinases de la famille AT et la DNA-PK.[1]

L'escalade de dose de MK-8776 (SCH 900776) (16 mg/kg et 32 mg/kg) induit des améliorations progressives de la réponse tumorale. Il est important de noter que les doses de ce composé associées à une activation robuste des biomarqueurs et à une meilleure réponse tumorale ne sont pas associées à une toxicité accrue sur les paramètres hématologiques chez les souris BALB/c. [1]

• Essai Chk1 SPA

  Un essai in vitro utilisant la His-Chk1 recombinante exprimée dans le système d'expression du baculovirus comme source d'enzyme et un peptide biotinylé basé sur CDC25C comme substrat. La His-Chk1 est diluée à 32 nM dans un tampon kinase contenant 50 mM Tris pH 8,0, 10 mM MgCl₂ et 1 mM DTT. Le peptide CDC25C (peptide biotinylé C-terminal CDC25 Ser216) est dilué à 1,93 μM dans le tampon kinase. Pour chaque réaction de kinase, 20 μL de solution enzymatique Chk1 à 32 nM et 20 μL de CDC25C à 1,926 μM sont mélangés et combinés avec 10 μL de MK-8776 (SCH 900776) dilué dans 10 % de DMSO, ce qui donne des concentrations finales de réaction de 6,2 nM Chk1, 385 nM CDC25C et 1 % de DMSO après addition de la solution de démarrage. La réaction est initiée par l'addition de 50 μL de solution de démarrage composée de 2 μM ATP et de 0,2 μCi de ³³P-ATP, ce qui donne une concentration finale de réaction de 1 μM ATP, avec 0,2 μCi de ³³P-ATP par réaction. Les réactions de kinase durent 2 heures à température ambiante et sont arrêtées par l'addition de 100 μL de solution d'arrêt composée de 2 M NaCl, 1 % H₃PO₄ et 5 mg/mL de billes SPA recouvertes de streptavidine. Les billes SPA sont capturées à l'aide d'une plaque filtrante GF/B à 96 puits et d'un récolteur universel Filtermate. Les billes sont lavées deux fois avec 2 M NaCl et deux fois avec 2 M NaCl avec 1 % d'acide phosphorique. Le signal est ensuite analysé à l'aide d'un compteur à scintillation liquide TopCount à 96 puits. Des courbes dose-réponse sont générées à partir de dilutions en série doubles en 8 points de ce composé. Les valeurs d'IC50 sont dérivées par analyse de régression non linéaire.

• Lignées cellulaires

  mESCs

• Concentrations

  10 μM

• Temps dincubation

  1 h

• Méthode

  Cells were treated with MK-8776 (SCH 900776), other inhibitors, or vehicle for 1 hour.

• Modèles animaux

  Female nude mice injected subcutaneously with A2780 or MiaPaCa2 cells

• Posologies

  ~50 mg/kg

• Administration

  Administered intraperitoneally