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Description biologique
| Spécificité | SLC22A2/OCT2 Antibody [D23A15] détecte les niveaux endogènes de la protéine SLC22A2/OCT2 totale. |
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| Contexte | SLC22A2, également connu sous le nom de Organic Cation Transporter 2 (OCT2), est un transporteur facilitateur polyspécifique (~63 kDa) de la famille SLC22. Principalement exprimé sur la membrane basolatérale des cellules tubulaires proximales rénales, OCT2 présente 12 domaines transmembranaires qui forment une cavité de liaison au substrat orientée vers l'intérieur. Il possède une grande boucle extracellulaire 2 contenant des sites de glycosylation pour la stabilité conformationnelle, et des résidus clés tels que l'Asp449 et le Trp222 sont essentiels pour la reconnaissance des cations et la gestion des états de protonation pendant le transport. OCT2 fonctionne via un mécanisme d'accès alterné, utilisant le gradient électrochimique (généralement -50 à -70 mV) sans nécessiter d'ATP ni de couplage au Na⁺. Ce transporteur déplace les cations organiques, y compris la metformine, le cisplatine, l'histamine, la dopamine et la créatinine, de manière bidirectionnelle, avec un rôle prédominant dans la capture basolatérale par les cellules tubulaires pour la sécrétion vectorielle. OCT2 montre une légère préférence pour les petits cations monovalents (Km 10–500 μM) et repose sur des ouvertures transitoires des pores déclenchées par l'occlusion du substrat, ce qui modifie l'accessibilité du substrat. Les interactions électrostatiques avec les amines chargées positivement permettent la sélectivité des cations, tandis que les anions sont exclus. Cette activité est cruciale pour l'élimination des toxines systémiques, des neurotransmetteurs et pour la disposition des xénobiotiques dans le foie, les neurones et le placenta. Les variants courants d'OCT2 (par exemple, R270S, A270S) réduisent la capacité de transport de 20 à 50 % pour certains substrats, augmentant le risque de néphrotoxicité avec les chimiothérapies à base de platine et réduisant l'efficacité de la metformine dans le diabète. |
Informations dutilisation
| Application | IHC, FCM | Dilution |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Réactivité | Human | ||||||
| Source | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||||
| Tampon de stockage | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Stockage (À partir de la date de réception) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Références
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