Stattic

Stattic inhibe la liaison d'un peptide contenant de la phosphotyrosine dérivé du récepteur gp130 au domaine SH2 de STAT3 d'une manière fortement dépendante de la température. Ce composé n'a qu'un très faible effet sur la liaison d'un peptide phosphorylé à la tyrosine au domaine SH2 de la tyrosine kinase Lck. Et il n'inhibe pas la dimérisation de deux autres facteurs de transcription dimères (c-Myc/Max et Jun/Jun). Il inhibe également les phosphopeptides marqués à la fluorescéine aux domaines SH2 de STAT1 et STAT5b. Ce produit chimique inhibe sélectivement la liaison de l'ADN des homodimères de STAT3 à une concentration de 10 μM. Il a été démontré qu'il inhibe la phosphorylation cellulaire de STAT3 à Tyr705 avec peu d'effet sur la phosphorylation de STAT1 à Tyr701 (dans les cellules HepG2) ou la phosphorylation de JAK1, JAK2 et c-Src (dans les cellules MDA-MB-231 et MDA-MB-235S). Ce composé augmente le taux d'apoptose des lignées cellulaires de cancer du sein dépendantes de STAT3. [1]

• Dépistage à haut débit et essais de polarisation de fluorescence

  Le dépistage est effectué à environ 30 °C. La spécificité des résultats de dépistage est validée dans des essais analogues pour la liaison des composés testés aux domaines SH2 de STAT1, STAT5 et Lck. La concentration finale des composants du tampon utilisés pour tous les essais FP est de 10 mM HEPES (pH 7,5), 1 mM EDTA, 0,1 % Nonidet P-40, 50 mM NaCl et 10 % DMSO. L'absence de dithiothréitol est essentielle pour l'activité inhibitrice. Les séquences des peptides sont : STAT3, 5-carboxyfluorescéine-GY(PO₃H₂)LPQTV-NH₂ ; STAT1, 5-carboxyfluorescéine-GY(PO₃H₂)DKPHVL ; STAT5, 5-carboxyfluorescéine-GY(PO₃H₂)LVLDKW ; et Lck, 5-carboxyfluorescéine-GY(PO₃H₂)EEIP. Pour l'analyse de spécificité à 30 °C, les protéines sont utilisées à 150 nM (STAT1, STAT3 et STAT5). Pour l'analyse de spécificité à 37 °C, les protéines sont utilisées à 370 nM (STAT3) ou 100 nM (Lck). Les protéines sont incubées avec les composés testés dans des tubes Eppendorf aux températures indiquées pendant 60 min avant l'ajout des peptides marqués à la 5-carboxyfluorescéine respectifs (concentration finale : 10 nM). Avant la mesure à température ambiante, les mélanges sont laissés à équilibrer pendant au moins 30 min. Les composés testés sont utilisés aux concentrations indiquées, dilués à partir d'une solution mère 20× dans du DMSO. Les courbes de liaison et les courbes d'inhibition sont ajustées avec SigmaPlot. Toutes les courbes de compétition sont répétées trois fois dans des expériences indépendantes.

• Lignées cellulaires

  Ly3 cells

• Concentrations

  ~2.5 μM

• Temps dincubation

  48 h

• Méthode

  MTS

• Modèles animaux

  Ly3 parental NOD/SCID IL2R null xenograft

• Posologies

  3.75 mg/kg every day

• Administration

  intra tumor