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In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble. * Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre. * Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)
Préparation des solutions mères
Activité biologique
Description
Suplatast Tosylate (IPD-1151T, Suplatast Tosilate) est un nouvel agent anti-asthmatique capsulaire qui supprime la production d'IgE ainsi que la synthèse d'IL-4 et d'IL-5 avec une IC50 supérieure à 100 μM.
Cibles
IL-4 (Cell-free assay)
IL-5 (Cell-free assay)
>100 μM
>100 μM
In vitro
Le Suplatast tosilate a un effet inhibiteur sur la production d'anticorps dans les cellules B spléniques isolées de souris et les cellules B du sang périphérique humain avec une IC50 >100 nM. Le Suplatast tosilate inhibe la production de cytokines murines et humaines, IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5 et IL-10 avec une IC50 >100 nM. L'induction de la synthèse d'IgE dépendante de Cryj1 médiatisée par SN-4 est supprimée de manière concentration-dépendante par le Suplatast tosilate (1 et 10 µg/ml) dans les cellules B autologues. La production d'IL-4, à la fois stimulée par SN-4 avec Cryj1 en présence d'APC autologues pendant 3 jours et produite par des PBMC stimulées par la PHA de donneurs normaux, est efficacement inhibée de manière concentration-dépendante par le Suplatast tosilate (1 et 10 μg/mL). Le Suplatast tosilate inhibe significativement l'expression de CD1a, CD80 et CD86 sur les cellules dendritiques (DCs) immatures et de CD1a, CD80, CD83 et CD86 sur les DCs matures. Le Suplatast tosilate inhibe également significativement la sécrétion de CCL17, IL-12p70 et IL-12p40; cependant, la sécrétion d'IL-10 n'est pas affectée. Les réponses prolifératives des cellules T CD4(+) allogéniques aux DCs traitées par le Suplatast tosilate sont supprimées. De plus, les DCs traitées par le Suplatast tosilate ont une capacité altérée à stimuler les cellules T CD4(+) à produire de l'IFN-gamma et de l'IL-5.
In vivo
Le Suplatast tosilate (100 mg/kg/100 μL) réduit significativement le nombre total de cellules et d'éosinophiles dans le BALF (environ -40 %) et inhibe presque complètement le développement de la BHR induite par l'antigène. Les résultats histologiques confirment la réduction de l'infiltration cellulaire sous-muqueuse dans le poumon et révèlent l'inhibition marquée des lésions des cellules épithéliales bronchiques. L'IgE spécifique à l'ovalbumine est légèrement mais significativement réduite. Les niveaux d'IL-4, d'IL-5 et d'IL-13 dans le BALF sont significativement diminués chez les souris traitées avec le Suplatast tosilate par rapport à ceux des souris non traitées.
Les cultures pour la production de cytokines sont mises en place à 37 °C comme suit : les mélanges de SN-4 et d'APC autologues (chacun 1 × 105 cellules/puits) sont cultivés pendant 3 jours avec 50 μg/mL de Cry j1 dans un volume total de 0,2 mL dans des microplaques à fond rond ; les PBMC (2 × 10 5 cellules/puits) de donneurs normaux sont cultivés pendant 24 heures avec 10 μg/ml de PHA dans un volume total de 0,2 mL dans des microplaques à fond plat à 96 puits ; et les cellules T purifiées (1 × 105 cellules/puits) de donneurs normaux sont cultivées dans un volume total de 1 ml pendant 24 heures avec un anticorps anti-CD3 mAb qui a été immobilisé sur des plaques à fond plat à 24 puits à une concentration de 5 µg/ml. Les cytokines dans les surnageants de culture sont dosées quantitativement par les kits disponibles commercialement suivants : IL-4 et IFN-γ. La sensibilité du test est de 30 pg/mL pour l'IL-4 et de 1 U/mL pour l'IFN-γ.
Allogeneic responder CD4+ T cells obtained from healthy subjects are purified from PBMCs by negative depletion of CD14+, CD16+, CD19+, CD56+, and CD8+ cells using magnetic cell separation system micro-beads and columns. After 7 days of culture with GM-CSF and IL-4, iDCs differentiated from monocytes in the presence or absence of Suplatast tosilate (10 and 100 mg/ mL) are co-cultured with purified 1×10 5 allogeneic CD41 T cells at varying ratios of iDCs in 96-well round bottomed culture plates for 5 days. Cells are pulsed with 1 μCi of 3H-methylthymidine for the last 8 hours of the culture period. Incorporated radioactivity is counted with a liquid scintillation counter, and proliferative responses are expressed as the mean 3 H-methylthymidine incorporation (counts per minutes) of triplicate wells_SEM. Proliferation of DCs alone or CD4+ T cells alone is also assessed.
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