T0070907

T0070907 est un antagoniste puissant et sélectif du PPARγ. Avec une affinité de liaison apparente de 1 nM, ce composé modifie de manière covalente le PPARγ sur la cystéine 313 dans l'hélice 3 du PPARγ2 humain. Il bloque la fonction du PPARγ dans les essais de gènes rapporteurs basés sur des cellules et les essais de différenciation des adipocytes. Conformément à son rôle d'antagoniste du PPARγ, cette substance chimique bloque le recrutement induit par l'agoniste des peptides dérivés de coactivateurs vers le PPARγ dans un essai basé sur la fluorescence résolue en temps homogène et favorise le recrutement du corépresseur transcriptionnel NCoR vers le PPARγ à la fois dans les essais de précipitation par la glutathion S-transférase et dans un essai de décalage sur gel dépendant du PPARγ/récepteur X des rétinoïdes (RXR) α. Des études avec des récepteurs mutants suggèrent qu'il module l'interaction du PPARγ avec ces protéines cofacteurs en affectant la conformation de l'hélice 12 du domaine de liaison du ligand du PPARγ. Fait intéressant, alors que le recrutement de NCoR induit par le T0070907 au niveau de l'hétérodimère PPARγ/RXRα peut être presque complètement inversé par le traitement simultané avec l'agoniste RXRα LGD1069, le traitement avec ce composé n'a que des effets modestes sur le recrutement de coactivateurs induit par le LGD1069 au niveau de l'hétérodimère PPARγ/RXRα. [1] Ce traitement chimique inhibe la prolifération, l'invasion et la migration, mais n'affecte pas significativement l'apoptose. L'inhibition moléculaire utilisant un récepteur dominant négatif (Δ462) donne des résultats similaires. Il médie également une diminution dose-dépendante de la phosphorylation du PPARγ, et de sa capacité à se lier à l'ADN, et peut affecter directement la signalisation de la protéine kinase activée par les mitogènes. [2]

Le préconditionnement au lipopolysaccharide atténue significativement le développement de la dysfonction rénale, des lésions hépatocellulaires et de l'insuffisance circulatoire ainsi que l'augmentation des niveaux plasmatiques d'interleukine-1 [bêta] causée par une endotoxémie sévère. Ce composé peut atténuer tous ces effets bénéfiques procurés par le préconditionnement au lipopolysaccharide [3]

• Essai de liaison au ligand

  Pour déterminer l'affinité de liaison de T0070907 aux PPARs, un essai de proximité par scintillation (SPA) est effectué avec les modifications suivantes. Une réaction de 90 μl contient du tampon SPA (10 mM KH₂PO₄, 10 mM KH₂PO₄, 2 mM EDTA, 50 mM NaCl, 1 mM dithiothréitol, 2 mM CHAPS, 10 % (v/v) glycérol, pH 7,1), 50 ng de GST-PPARγ (ou 150 ng de GST-PPARα, GST-PPARδ), 5 nM de radioligands marqués au ³H, et 5 μl de ce composé dans du Me₂SO. Après incubation pendant 1 h à température ambiante, 10 μl de billes SPA recouvertes de polylysine (à 20 mg/ml dans du tampon SPA) sont ajoutés, et le mélange est incubé pendant 1 h avant lecture dans Packard Topcount.

• Lignées cellulaires

  MCF-7 cells

• Concentrations

  20 μM and higher concentrations

• Temps dincubation

  48 h

• Méthode

  MTS assay

• Modèles animaux

  Preconditioning is performed by administering a low dose (1 mg/kg) of Escherichia coli LPS (serotype 0.127:B8) intraperitoneally 24 hr before the induction of severe endotoxemia.

• Posologies

  1 mg/kg

• Administration

  intraperitoneally