Tofacitinib (CP-690550)

N° de catalogueS2789 Lot :S278907

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Données techniques

Formule

C16H20N6O
Poids moléculaire 312.37 Numéro CAS 477600-75-2
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 62 mg/mL (198.48 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

 3.100mg/ml (9.92mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 62 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Tofacitinib est un nouvel inhibiteur de JAK3 avec une IC50 de 1 nM dans les essais sans cellules, 20 à 100 fois moins puissant contre JAK2 et JAK1. Ce composé inhibe l'expression des protéines antiapoptotiques BCL-A1 et BCL-XL dans les cellules dendritiques plasmacytoïdes humaines (PDC) et induit l'apoptose des PDC.
Cibles
JAK3
(Cell-free assay)		 JAK2
(Cell-free assay)		 JAK1
(Cell-free assay)
1 nM 20 nM 112 nM
In vitro CP-690550 est un inhibiteur oral spécifique de JAK3, il est 20 à 100 fois moins puissant pour JAK2 et JAK1 avec une IC50 de 20 nM et 112 nM, respectivement. Ce composé n'a pas d'activité puissante contre 30 autres kinases (toutes les IC50 médianes > 3000 nM). Il inhibe la prolifération induite par l'IL-2 avec une puissance 30 fois supérieure à ses effets sur la prolifération induite par le GM-CSF. Ce produit chimique inhibe efficacement une réaction lymphocytaire mixte murine (MLR) (IC50 = 91 nM). Il inhibe puissamment la régulation à la hausse de CD23 induite par l'IL-4 (IC50=57 nM) et l'expression du complexe majeur d'histocompatibilité de classe II (MHCII) (IC50=71 nM) sur les cellules B murines. Une recherche récente indique qu'une faible dose de ce composé accélère le début de l'encéphalomyélite auto-immune expérimentale en potentialisant la différenciation des Th17.
In vivo Dans un modèle murin de transplantation cardiaque hétérotopique (cœur de donneur DBA2 dans un hôte C57/BL6), Tofacitinib entraîne une augmentation dose-dépendante de la survie des cœurs transplantés. L'EC50 (concentration du médicament dans le sang à laquelle 50% des souris maintiendront leur greffe pendant >28 jours) est d'environ 60 ng/mL. Ce composé prévient le rejet de reins allogéniques chez les primates non humains (NHP, macaca fascicularis) (MST de 62 et 83 jours pour les groupes de 50 à 100 ng/ml et 200 à 400 ng/ml, respectivement). Les souris traitées chroniquement avec ce composé (1,5-15 mg/kg/jour) présentent des altérations dose- et temps-dépendantes des sous-populations lymphocytaires lorsqu'elles sont examinées par cytométrie en flux. Le changement le plus spectaculaire observé est une réduction de 96% du nombre de cellules NK1.1+TCRb spléniques après 21 jours de traitement. Les réponses d'hypersensibilité de type retardé (DTH) chez les souris sensibilisées sont réduites de manière dose-dépendante après traitement avec ce produit chimique (1,87–30 mg/kg, s.c.). Une survie prolongée des cœurs néonatals Balb/c implantés dans le pavillon de l'oreille de souris C3H/HEN non concordantes pour le CMH est observée avec cette monothérapie (10–30 mg/kg/jour), mais améliorée en combinaison avec la ciclosporine (10 mg/kg/jour).

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Essai de la kinase JAK3

    Un fragment codant pour le domaine catalytique de la JAK3 humaine (785aa à 1125aa, domaine catalytique JH1) est amplifié par PCR à partir de l'ADNc pleine longueur et cloné dans le site EcoRI du vecteur de transfert de baculovirus pVL1393. Le baculovirus recombinant est utilisé pour infecter les cellules Sf9 (Spodoptera frugipedra) et la protéine de fusion GSTJAK3 recombinante est isolée sur de la sépharose glutathion. La protéine de fusion est éluée avec du glutathion réduit et stockée dans un tampon contenant 50 mM Tris, pH 7,5, 10 mM DTT et 10% de glycérol. L'activité de la kinase JAK3 est mesurée par ELISA comme suit : Les plaques sont recouvertes pendant une nuit d'un copolymère aléatoire d'acide L-glutamique et de tyrosine (4:1) (100 ug/mL). Les plaques sont lavées et la JAK3 JH1:GST recombinante (100 ng/puits) avec ou sans inhibiteurs est incubée à température ambiante pendant 30 minutes, après quoi l'anticorps anti-phosphotyrosine PY20 conjugué à la HRP (ICN) est ajouté et développé par TMB (3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine). D'autres kinases (tableau 1) sont produites dans E. coli ou dans des cellules d'insectes, selon ce qui est jugé optimal pour la kinase donnée. L'activité catalytique des tyrosines kinases est mesurée à l'aide de l'ELISA susmentionné, tandis que les sérine/thréonine kinases sont testées à l'aide d'essais enzymatiques radioactifs.
Test cellulaire :

[1]
  • Lignées cellulaires

    Human T blasts cell

  • Concentrations

    0-4000 nM

  • Temps dincubation

    4 days

  • Méthode

    To measure IL-2-dependent proliferation, isolated lymphocytes are resuspended to a cell density of 1-2 × 106/mL in complete RPMI medium (RPMI 1640 containing 10% (w/v) fetal calf serum (FCS), 1%(w/v) penicillin and treptomycin).Phytohemagluttinin (PHA) is added to a final concentration of 10mg/mL, and the culture incubated for 3 days at 37 °C in a humidified 5% (v/v) CO2 incubator to upregulate IL-2R and JAK3 expression. IL-2 (200U/mL), with or without this compound is then added and the cells are incubated for 72 hours at 37 °C in a humidified 5% (v/v) CO2 incubator, after which 50 mL of 3H-thymidine (5mCi/mL) is added. The plates are incubated for an additional 18 hours, harvested with a 96-well harvester, and counted on a scintillation counter. HUO3 cells are maintained in culture with granulocyte-macrophage colony stimulating factor and human foreskin fibroblasts are maintained in culture with 10% fetal calf serum. This compound is added to freshly plated cells and cultured for 4 days. 3Hthymidine is added during the last 18 hours of the culture period.
Étude animale :

[1]
  • Modèles animaux

    DBA/2 and C57/BL6 mice

  • Posologies

    0-136 ng/mL

  • Administration

    Administered via osmotic minipump infusion

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14593182/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14678034/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18242596/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22252297/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16378072/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14678034/

Validation du produit par le client

TRAP-positive multinucleated cell differentiation depends on JAK and is inhibited by tofacitinib in vitro. Effect of tofacitinib on the differentiation of TRAP-positive multi-nucleated cells in vitro (n =3 wells/experiment). Original magnification x 100.

Données de [ Arthritis Rheumatol , 2014 , 66(1), 121-9 ]

Effect of a panel of IFN inhibitors on BUNΔNSs virus growth in A549 cells. The inhibitor panel consists of small molecules that target the IKK2 (TPCA-1) and TBK1 (BX795, MRT6884, MRT6707) components of the IFN induction pathway and JAK1 (Cyt387, AZD1480, Ruxolitinib, Tofacitinib) a component of the IFN signaling pathway. Effect of the inhibitors was compared with A549 cells constitutively expressing viral IFN antagonists that block IFN production (BVDV-Npro) or IFN signaling (PIV5-V). Effect of various inhibitor concentrations on plaque size formation. Plaques were visualized 2 days post-infection by crystal violet staining.

Données de [ PLoS One , 2014 , 9(11), e112014 ]

Effects of CP-690550 on NKTCL cell lines. NK-S1, KHYG-1 cells were treated with CP-690550 for 48 hours, and the effect on STAT5 phosphorylation was evaluated by Western blotting.

Données de [ Cancer Discov , 2012 , 2(7), 591-7 ]

AE cells were treated with vehicle control (DMSO), a MEK inhibitor (PD98059), a PI3K inhibitor (LY294002) or a JAK2 inhibitor (CP690550) at indicated concentrations for 24 hours, followed by lysis for immunoblotting.

Données de [ Blood , 2012 , 120(4), 709-19 ]

Sellecks Tofacitinib (CP-690550) A été cité par 195 Publications

A patient-derived T cell lymphoma biorepository uncovers pathogenetic mechanisms and host-related therapeutic vulnerabilities [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00102-8] PubMed: 40147445
In silico modeling guides identification of novel JAK1 variants associated with immune dysregulation [ EMBO Mol Med, 2025, 10.1038/s44321-025-00317-0] PubMed: 41136770
Differential effects of tofacitinib on macrophage activation contribute to lack of response in ulcerative colitis patients [ J Crohns Colitis, 2025, 19(6)jjaf076] PubMed: 40320713
Keloids and inflammation: the crucial role of IL-33 in epidermal changes [ Front Immunol, 2025, 16:1514618] PubMed: 40230853
Rheumatoid arthritis associated cytokines and therapeutics modulate immune checkpoint receptor expression on T cells [ Front Immunol, 2025, 16:1534462] PubMed: 39981237
Polarization of Vδ2 T cells to a Th2-like phenotype promotes plasmablast differentiation and possesses pro-fibrotic properties in IgG4-related disease [ Front Immunol, 2025, 16:1550405] PubMed: 40213561
Membrane-bound IL-15 co-expression powers a potent and persistent CD70-targeted TRuC T-cell therapy [ Front Immunol, 2025, 16:1609658] PubMed: 40519930
Associations between ionomic profile and metabolic abnormalities in a murine model of sodium sulfide induced alopecia areata [ Front Pharmacol, 2025, 16:1507348] PubMed: 40438604
Targeting interferon responses in juvenile dermatomyositis: Siglec-1 as an in vitro biomarker for JAK inhibitor efficacy [ Rheumatology (Oxford), 2025, keaf227] PubMed: 40372702
Unidirectional Crosstalk Between NTRK1 and IGF2 Drives ER Stress in Chronic Pain [ Biomedicines, 2025, 13(7)1632] PubMed: 40722704

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