U-73122

U73122 inhibe significativement l'agrégation des plaquettes humaines induite par une variété d'agonistes, y compris le collagène, la thrombine, l'ADP, l'acide arachidonique, avec une IC50 de 1-5 μM. Ce composé (10 μM) inhibe la production d'IP3 et l'augmentation rapide subséquente du Ca²⁺ cytosolique induite par la thrombine ou l'U-46619 en inhibant l'hydrolyse du phosphatidyl[³H]inositol et du phosphatldyl[³H]inosito1 4,5-bisphosphate catalysée par une fraction soluble des plaquettes (K_i=9 et 40 μM, respectivement). Il inhibe la production de thromboxane B induite par le collagène en inhibant la mobilisation de l'acide arachidonique couplée au récepteur. Ce produit chimique inhibe également l'agrégation des neutrophiles polymorphonucléaires humains induite par le FMLP et la production associée d'IP3 et de diacylglycérol. [1]

Ce composé provoque une inhibition dose-dépendante de la libération de MPO et de B12-BP induite par C5a, FMLP, PAF et LTB4 à partir de PMN traités à la cytochalasine B. Les valeurs d'IC50 sont de 60 (FMLP), 110 (LTB4), 115 (C5a) et 120 (PAF) nM pour la libération de MPO ; et de 105 (FMLP), 110 (LTB4), 120 (C5a) et 140 (PAY) nM pour la libération de B12-BP. C'est aussi un puissant inhibiteur de la production d'anion superoxyde par les PMN traités à la cytochalasine B activés avec C5a ou FMLP avec une IC50 de 160 et 300 nM, respectivement. Ce produit chimique provoque la suppression de l'augmentation de [Ca²⁺]_i, de la production d'IP3 et de la production de DAG dans les PMN stimulés par le FMLP avec une IC50 de 500 nM, 2 μM et 2 μM, respectivement. 3 μM de ce composé provoquent une inhibition à 100 % de l'activité GTPase induite par le FMLP. Il provoque une inhibition dose-dépendante de l'association évoquée par le FMLP de la PKC avec la fraction particulaire extractible des PMN, mais pas une préparation soluble de PKC de PMN. [2]

Il inhibe significativement la PLC-β2 recombinante humaine, avec une IC50 d'environ 6 μM. Ce composé a peu d'effet sur la PLC-β1, la PLC-β3 ou la PLC-β4. Il réduit le flux de Ca²⁺ et la chimiotaxie induits par l'interleukine-8 et le leucotriène B4 dans les neutrophiles humains avec une IC50 d'environ 6 μM et environ 5 μM, respectivement. [3]

1 μM de ce composé bloque les augmentations de la concentration intracellulaire de Ca²⁺ libre induites par la bradykinine (BK) dans les cellules NG108-15 non différenciées. L'IC50 pour une exposition de 20 minutes est d'environ 200 nM. 1 μM de ce produit chimique produit une augmentation faible mais significative de [Ca²⁺]_i qui résulte de la libération de Ca²⁺ à partir d'un compartiment intracellulaire. Dans les cellules NG108-15 différenciées, il bloque complètement l'influx de Ca²⁺ induit par la dépolarisation. En revanche, dans les neurones DRG, ce composé n'inhibe que légèrement les canaux Ca²⁺ voltage-dépendants. [4]

C'est un inhibiteur relativement spécifique de l'activation de la phospholipase C médiée par les protéines G dans les acini pancréatiques. Ce composé inhibe l'hydrolyse du phosphatidylinositol (PI) lors de la stimulation par la cholécystokinine (de 81 %) ou le carbachol (de 73 %) à une concentration d'effet maximal de 10 μM. Ce produit chimique (10 μM) inhibe les augmentations de [Ca²⁺]_i stimulées par de fortes concentrations de sécrétagogues dans les acini chargés en fura-2. Il inhibe également le signal [Ca²⁺]_i généré par la stimulation directe des protéines G avec du fluorure de sodium. Ce composé inhibe rapidement le signal [Ca²⁺]_i oscillant déclenché par de faibles concentrations de cholécystokinine ou de carbachol. [5]

Il augmente l'activité de la hPLCβ3 de manière dose- et temps-dépendante dans un système micellaire sans cellules, avec une augmentation allant jusqu'à 8 fois de l'activité enzymatique et une EC50 de 13,6 μM. L'activation de la hPLCβ3 par ce composé nécessite une modification covalente des cystéines. Ce produit chimique (10 μM) active également la hPLCγ1 (>10 fois) et la hPLCβ2 (~2 fois) ; la PLC δ1 n'est ni activée ni inhibée. [6]

U73122 (30 mg/kg i.p.) bloque le gonflement de la patte arrière des rats de 65 et 80 % respectivement 1 et 3 h après l'administration de carragénine. Ce composé (0,1 mg/mL) inhibe l'accumulation de macrophages et de lymphocytes induite par la carragénine dans les chambres sous-cutanées chez les chiens de 65 et 74 %, respectivement. Ce produit chimique (30 mg/kg i.p.) inhibe totalement l'augmentation de l'infiltration de macrophages et de lymphocytes et la production de prostaglandine E2 (de 80 %) induite par le LPS dans un modèle de péritonite chez la souris, et inhibe l'œdème de l'oreille induit par le 12-O-tétradécanoyl-phorbol-13-acétate chez la souris. [3]

• Dosage de l'activité de la phospholipase C spécifique des phosphoinositides

  Les mélanges d'essai (0,2 mL) contiennent un tampon d'essai (sans leupeptine), du CaCl₂ (une quantité calculée pour produire un tampon Ca-EGTA avec la concentration de Ca²⁺ libre requise), une fraction soluble de plaquettes (5-15 μg de protéines) et 4 nmol de phosphatidyl[³H]inositol ou de phosphatidyl[³H]inositol 4,5-bisphosphate. Les mélanges de substrats sont constitués soit de phosphatidyl[³H]inositol (3,4 Ci/mol) plus 1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphoéthanolamine (rapport 1:0,4 M) soit de phosphatidyl[³H]inositol4,5-bisphosphate (7 Ci/mol) plus 1-palmitoyl 2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphoéthanolamine (rapport 1:4 M). Les mélanges de substrats sont préparés sous forme de suspensions 10× de petites vésicules unilamellaires par co-sonication des lipides dans le tampon d'essai (sonicateur à microsonde Vibra Cell, 75 W, 2 fois 60 sec). L'U-73122 est ajouté aux mélanges d'essai dans 2 μL de DMSO. Cette quantité de DMSO a un effet négligeable sur l'activité de la phospholipase C dans ces conditions. Ce composé est incubé dans des tubes en verre à 37 ℃ pendant 10 min, puis inactivé avec 1,6 mL de chloroforme/méthanol/HCl (1 N) (108:108:25, en volume). Après un mélange vigoureux et une centrifugation (500 g pendant 10 min), une partie (0,7 mL) de la couche supérieure aqueuse (0,9 mL) est transférée dans un flacon de scintillation contenant 10 mL de liquide de scintillation ACS. Le tritium dans les produits hydrosolubles (>90 % étant des inositol phosphates) est mesuré par spectrométrie à scintillation liquide. L'hydrolyse des phosphoinositides dans ces conditions ne dépasse jamais 10 % du total ajouté et se déroule à un rythme constant tout au long de la période d'incubation. Les valeurs de blanc sont déterminées à partir de mélanges d'essai auxquels la fraction soluble de plaquettes est ajoutée après le réactif d'arrêt.

• Modèles animaux

  Swiss-Webster mic

• Posologies

  30 mg/kg

• Administration

  i.p.