Lersivirine (UK-453061)

Lersivirine (UK-453061) se lie à la Reverse Transcriptase (RT) du VIH-1 wt avec un K_d de 624 nM. C'est un très faible inhibiteur de l'ADN polymérase bêta humaine, avec une IC50 moyenne géométrique extrapolée d'environ 20 mM, ce qui se traduit par un indice de sélectivité prédit de 166 000. Ce composé est capable d'inhiber la réplication du virus VIH-1 dans les cellules MT-2 infectées par le wt NL4-3, avec une EC50 allant de 5 nM à 35 nM pour un MOI allant de 0,005 à 0,5. Il conserve son activité contre 80% des virus avec des génotypes contenant K103N comme mutation NNRTI unique (contre 7% pour l'éfavirenz), 57% des virus avec des génotypes contenant Y181C comme mutation NNRTI unique (43% pour l'éfavirenz), et 46% des virus avec des génotypes contenant G190A comme mutation NNRTI unique (0% pour l'éfavirenz). La Lersivirine inhibe la réplication de la souche Ba-L dans les PBL, avec une EC50 moyenne géométrique égale à 3,38 nM (IC à 95%, 2,26 à 5,05 nM) et une EC90 égale à 9,87 nM (IC à 95%, 6,63 à 14,7 nM), sans cytotoxicité observée jusqu'à 50 μM. Les combinaisons de celle-ci avec des médicaments de la classe NRTI (abacavir, didanosine, emtricitabine, lamivudine, ténofovir et zidovudine) entraînent des interactions synergiques. [1]

Chez la souris, la Lersivirine (UK-453061) n'est pas tératogène.[3]

• Tests enzymatiques RT

  Les activités de Lersivirine (UK-453061) et d'éfavirenz contre la RT wt (souche BH10) sont déterminées à l'aide d'un essai d'extension d'amorce incorporant une amorce/matrice ADN/ARN. L'ADN de l'amorce 5'biotinylée est un oligo(dT) de 16 mers, qui est hybridé à une matrice de poly(rA) d'environ 300 bases. L'incorporation de [³H]TTP(dTTP) par Reverse Transcriptase entraîne l'extension de l'amorce. Pendant la réaction, l'amorce/matrice est liée à une plaque à scintillation revêtue de streptavidine (NEN). Les nucléotides tritiés incorporés peuvent alors stimuler le scintillateur pour produire un signal qui est mesuré à l'aide d'un compteur à scintillation. Les composés qui inhibent l'activité ADN polymérase dépendante de l'ARN de la RT produisent un signal réduit.

• Lignées cellulaires

  SupT1 cells

• Concentrations

  increasing concentrations from 5 nM

• Temps dincubation

  Every 7 days

• Méthode

  For inhibitor escalation studies, SupT1 cells are initially infected with HIV-1 NL4-3 wt for 1 h at 37°C and the virus-infected cells are passaged weekly in SupT1 cells in the presence of increasing concentrations of lersivirine (UK-453061) from a starting concentration of 5 nM (IC50 in this assay system) in 12-well plates (6 × 10⁵ cells/well). Throughout the passaging period, ongoing virus replication is monitored weekly by observing cytopathic effects (syncytia). Every 7 days, virus supernatant is passaged onto fresh cells at the same density with fresh medium containing this compound. The concentration of it is increased by 2-fold and 5-fold that of the previous concentration upon subsequent passage whenever evidence of viral replication is observed. Virus stocks for phenotypic characterization are produced in SupT1 cells in the absence of compound and are tested for their sensitivity to lersivirine in an antiviral assay using HeLaP4 cells.

• Modèles animaux

  Mated Crl:CD1(ICR) mice

• Posologies

  150 mg/kg, 350 mg/kg, 500 mg/kg

• Administration

  Oral gavage