UNC0631

N° de catalogueS7610 Lot :S761003

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Données techniques

Formule

C₃₇H₆₁N₇O₂

Poids moléculaire

635.93

Numéro CAS

1320288-19-4

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (157.25 mM)

Ethanol

100 mg/mL (157.25 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	10%DMSO 1 40%PEG300 2 5%TWEEN80 3 45%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	5.000mg/ml (7.86mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 100 μL of 50 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 450 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

UNC 0631 est un puissant inhibiteur de la Histone Methyltransferase G9a avec une CI50 de 4 nM. Il réduit potentiellement les niveaux de H3K9me2 dans les cellules MDA-MB-231 avec une CI50 de 25 nM.

Cibles

G9a

In vitro

Dans les cellules MCF7, 22RV1 et IMR90, UNC0631 réduit puissamment les niveaux de H3K9me2 et montre une excellente séparation de la puissance fonctionnelle par rapport à la toxicité cellulaire. Ce composé peut donc être utilisé comme un outil pour la communauté de recherche biomédicale afin d'étudier davantage la biologie de G9a et son rôle dans le remodelage de la chromatine.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Tests couplés à la SAHH Ce test utilise la SAHH pour hydrolyser le produit de méthyltransférase SAH en homocystéine et adénosine en présence d'adénosine désaminase qui convertit l'adénosine en inosine. La concentration d'homocystéine est ensuite déterminée par conjugaison de sa partie sulfhydryle libre à un fluorophore sensible au thiol, ThioGlo. Pour les déterminations de CI50, les mélanges de test sont préparés dans un tampon phosphate de potassium 25 mM pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0,01 % Triton X-100 avec 5 μM SAHH, 0,3 U/mL d'adénosine désaminase, 25 μM SAM et 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 et SUV39H2 sont testés respectivement à 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM et 100 nM. Ce composé est ajouté à des concentrations allant de 4 nM à 16 μM. Après 2 min d'incubation, les réactions sont initiées par l'ajout des peptides histones : 10 μM H3(1–25) pour G9a, 20 μM H3(1–25) pour GLP, 100 μM H3(1–25) pour SETD7, 500 μM H4(1–24) pour SETD8, 10 μM H4(1–24) pour PRMT3 et 200 μM H3K9Me1 (1–15) pour SUV39H2. La réaction de méthylation est suivie en surveillant l'augmentation de la fluorescence à l'aide d'un lecteur de plaques Biotek Synergy2 avec un filtre d'excitation de 360/40 nm et un filtre d'émission de 528/20 nm pendant 20 min dans un format de plaque à 384 puits. Les valeurs d'activité sont corrigées en soustrayant le bruit de fond causé par le peptide ou la protéine. Les valeurs de CI50 sont calculées à l'aide de Sigmaplot. Les écarts types sont calculés à partir de deux expériences indépendantes.
Test cellulaire :^[1]	Lignées cellulaires MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells Concentrations ~10 μM Temps dincubation 48 hours Méthode MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Test kinase :^{^[1]}

Tests couplés à la SAHH
Ce test utilise la SAHH pour hydrolyser le produit de méthyltransférase SAH en homocystéine et adénosine en présence d'adénosine désaminase qui convertit l'adénosine en inosine. La concentration d'homocystéine est ensuite déterminée par conjugaison de sa partie sulfhydryle libre à un fluorophore sensible au thiol, ThioGlo. Pour les déterminations de CI50, les mélanges de test sont préparés dans un tampon phosphate de potassium 25 mM pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0,01 % Triton X-100 avec 5 μM SAHH, 0,3 U/mL d'adénosine désaminase, 25 μM SAM et 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 et SUV39H2 sont testés respectivement à 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM et 100 nM. Ce composé est ajouté à des concentrations allant de 4 nM à 16 μM. Après 2 min d'incubation, les réactions sont initiées par l'ajout des peptides histones : 10 μM H3(1–25) pour G9a, 20 μM H3(1–25) pour GLP, 100 μM H3(1–25) pour SETD7, 500 μM H4(1–24) pour SETD8, 10 μM H4(1–24) pour PRMT3 et 200 μM H3K9Me1 (1–15) pour SUV39H2. La réaction de méthylation est suivie en surveillant l'augmentation de la fluorescence à l'aide d'un lecteur de plaques Biotek Synergy2 avec un filtre d'excitation de 360/40 nm et un filtre d'émission de 528/20 nm pendant 20 min dans un format de plaque à 384 puits. Les valeurs d'activité sont corrigées en soustrayant le bruit de fond causé par le peptide ou la protéine. Les valeurs de CI50 sont calculées à l'aide de Sigmaplot. Les écarts types sont calculés à partir de deux expériences indépendantes.

Test cellulaire :^[1]

Lignées cellulaires
MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells
Concentrations
~10 μM
Temps dincubation
48 hours
Méthode
MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21780790/

Sellecks UNC0631 A été cité par 1 Publication

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]	PubMed: 30135193

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]

PubMed: 30135193

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