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In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO
Corn oil
Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.
5.000mg/ml
(9.81mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble. * Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre. * Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)
Préparation des solutions mères
Activité biologique
Description
L'UNC0638 est une sonde chimique puissante, s ective et p
rante pour la m hyletransf
ase d'histone G9a et GLP avec une IC50 respective de <15 nM et 19 nM, montrant une s ectivit sur un large ail de cibles ig
iques et non ig
iques. Ce compos poss de des activit s antivirales.
Cibles
G9a (Cell-free assay)
GLP (Cell-free assay)
<15 nM
19 nM
In vitro
L'UNC0638 est une sonde chimique puissante, s ective et p
rante pour G9a et GLP, avec un rapport toxicit /fonction de >100, contre <6 pour le BIX01294. Ce compos est un inhibiteur s ectif de G9a et GLP sur un large ail de cibles ig
iques et non ig
iques. Il est plus de 10 000 fois s ectif contre SET7/9 (une HMTase H3K4), SET8 (une HMTase H4K20), PRMT3 et SUV39H2. Dans les cellules MDA-MB-231, cette substance chimique (exposition de 48 h) r uit les niveaux de H3K9me2 de mani
e concentration-d endante avec une IC50 de 81 nM. Son traitement sur une vari de lign es cellulaires entra
e une baisse des niveaux globaux de H3K9me2, ivalents aux niveaux observ s pour le d rage par petit ARN en inglette de G9a et GLP, la puissance fonctionnelle de ce compos ant bien s ar e de sa toxicit . Il r uit de mani
e marqu e la clonog icit des cellules MCF7, r uit l'abondance des marques H3K9me2 aux promoteurs des g
es endog
es r gul s par G9a connus et a affect de mani
e disproportionn e plusieurs loci g
iques codant pour des microARN. Dans les cellules souches embryonnaires de souris, cette sonde r active les g
es silenci s par G9a et un g
e rapporteur r roviral de mani
e concentration-d endante sans promouvoir la diff nciation.
In vivo
Dans les udes de m abolisme et de pharmacocin ique chez la souris, l'UNC0638 a pr sent une clairance l v e, une courte demi-vie, un volume de distribution l v et une faible exposition apr s administration intraveineuse, orale ou intrap riton ale. Ainsi, bien que ce compos ne soit probablement pas adapt aux udes animales in vivo en raison de faibles niveaux d'exposition, sa grande stabilit dans les conditions d'essai cellulaire, combin e une forte puissance et s ectivit , en fait un outil chimique id al pour les udes bas es sur les cellules.
Ce dosage utilise la SAHH pour hydrolyser le produit de m hylation S-ad
sylhomocyst ine en homocyst ine et ad
sine en pr sence d'ad
sine d aminase qui convertit l'ad
sine en inosine. La concentration d'homocyst ine est ensuite d termin e par conjugaison de son groupement sulfhydryle libre un fluorophore sensible au thiol, ThioGlo. Pour les d terminations d'IC50, les m langes de dosage sont pr ar es dans un tampon phosphate de potassium 25 mM pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl2, 0,01% Triton X 100 avec 5 M de SAHH, 0,3 U/mL d'ad
sine d aminase, 25 M de SAM et 15 M de ThioGlo. G9a, EHMT1, SETD7, SETD8, PRMT3 et SUV39H2 sont dos s 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 1 M et 100 nM, respectivement. UNC0638 est ajout des concentrations allant de 4 nM 16 M. Apr s 2 min d'incubation, les r actions sont initi es par l'addition des peptides histones : 10 M H3(1-25) pour G9a, 20 M H3(1-25) pour EHMT1, 100 M H3(1-25) pour SETD7, 500 M H4(1-24) pour SETD8, 10 M H4(1-24) pour PRMT3 et 200 M H3K9Me1 (1-15) pour SUV39H2. La r action de m hylation est suivie en surveillant l'augmentation de la fluorescence l'aide d'un lecteur de plaques Biotek Synergy2 avec un filtre d'excitation de 360/40 nm et un filtre d' ission de 528/20 nm pendant 20 min dans un format de plaque 384 puits. Les valeurs d'activit sont corrig es en soustrayant le fond caus par le peptide ou la prot ine. Les valeurs d'IC50 sont calcul es l'aide de Sigmaplot. Les arts-types sont calcul s partir de deux exp
iences ind endantes.
Approximately 5×105 cells were plated onto 75 cm2 flasks. MCF7 and U2OS cells were grown in Minimal Essential Media (MEM) without phenol red supplemented with Earl's salts, 10% FBS, 1 mM Pyruvate, 2 mM Glutamine, and 1×non-essential amino acids. H1299 cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with phenol red supplemented with 10% FBS and 1×Anti-Anti. At the time of cell plating, media was supplemented with 3 μM UNC638A or the equivalent DMSO vehicle. The media with 3 μM this compound but without any cells was also used as a control. All flasks were incubated at 37℃/5% CO2. After 65 hours, media was collected from the cells and centrifuged to remove any cell debris. The media (10 to 15 mL) from each of study groups was mixed with HPLC grade chloroform (7 to 12 mL). After the mixture was gently shaken, it was allowed to sit until the organic layer and the aqueous layer separated. The organic layer was collected, dried over anhydrous Na2SO4, and concentrated in vacuo. The resulting residue was dissolved in 100 μL of methanol and the solution was analyzed using an Agilent 6110 LC/MS Series system with UV detector set to at 254 nm. Samples were injected (10 μL) onto a Phenomenex Kinetex 2.1 x 100 nm, 2.6 μM, C18 column at room temperature and eluted with 72% B (MeCN) with A being H2O + 0.1% formic acid. The flow rate was 0.3 mL/min. No degradation products of this chemical were observed for any of treatment groups.
Coordinated repression of totipotency-associated gene loci by histone methyltransferase EHMT2 through binding to LINE-1 regulatory elements
[ bioRxiv, 2024, 2024.12.18.629181]
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