Wortmannin (SL-2052)

L'inhibition de MLCK par la Wortmannine n'est pas affectée par la calmoduline ou le substrat peptidique, tandis qu'elle est réduite par une forte concentration d'ATP. Ce composé interagit directement avec le domaine catalytique de MLCK et entraîne une perte irréversible de l'activité enzymatique. Il n'a pas d'effet inhibiteur sur la protéine kinase dépendante de l'AMPc, la protéine kinase dépendante du GMPc et la protéine kinase II dépendante de la calmoduline, et a peu d'effet sur l'activité de la protéine kinase C. [1]

Cet inhibiteur inhibe la formation de PtdInsP3 (phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate) stimulée par le N-formylméthionyl-leucylphénylalanine (fMLP) avec une IC50 de 5 nM et cette inhibition est complètement abolie lorsque les neutrophiles humains sont prétraités avec 100 nM de ce composé, avec des niveaux de PtdInsP2 augmentés et aucun effet sur les teneurs cellulaires en PtdInsP et PtdIns. Il pourrait développer des changements oscillatoires de la teneur en F-actine et n'inhibe pas la polymérisation de l'actine stimulée par le fMLP dans les neutrophiles. [2]

Ce produit chimique inhibe irréversiblement l'activité de la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-kinase) en se liant à la protéine de 110 kDa (IC50 de 3 nM) et n'a aucun effet sur la PI4-kinase dans les cellules RBL-2H3. Il inhibe également la libération de leucotriènes, sans effet sur l'activation de la tyrosine kinase Lyn. [3]

Ce composé abolit complètement l'absorption de l'hexose induite dans les adipocytes de rat isolés à 0,1 μM, sans altérer l'activité lipolytique stimulée. [4]

Il supprime la production induite d'oxyde nitrique de 50 % à 500 nM dans les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine, en réponse à l'IGF-1. [5]

Ce produit chimique supprime la réparation des cassures double brin de l'ADN (DSB) et n'a aucun effet sur les niveaux de DSB ou la cinétique de réparation des cassures simple brin (SSB) dans les cellules ovariennes de hamster chinois à 50 μM. Il pourrait potentialiser la cytotoxicité induite par les rayonnements ionisants (IR) sans toxicité propre. [6]

Cet inhibiteur inhibe l'activité de la polo-like kinase (PLK1) avec une IC50 de 24 nM dans des cellules intactes arrêtées en G2/M. [7]

Il augmente l'accumulation d'IL-6 médiée par les récepteurs Toll-like (TLR) dans les macrophages humains avec une EC50 de 50 nM. Parallèlement, ce composé améliore significativement l'expression de la monoxyde d'azote synthase inductible (iNOS) médiée par les TLR et l'accumulation de nitrites dans les macrophages de souris. Il active le facteur nucléaire-κB et régule à la hausse la production d'ARNm des cytokines. [8]

Ce produit chimique inhibe également la polo-like kinase (PlK) 1 et PlK3, qui jouent des rôles importants dans la mitose. Son traitement pourrait entraîner une réduction de la phosphorylation de p53 sur la sérine 20 induite par les dommages à l'ADN. [9]

Il supprime la phosphorylation d'Akt induite par l'hyaluronane et la motilité/migration cellulaire dans les cellules SW1990. [10]

La Wortmannine inhibe la métastase péritonéale des cellules SW1990 chez la souris à 1 mg/kg, sans perte de poids. [10]

Ce composé inhibe la phosphorylation de la phosphatidylinositide 3-kinase-protéine kinase B (PKB)/Akt dans les tissus normaux (homogénats de poumon, de cœur et de cerveau) et le tissu tumoral chez la souris, sans mortalité ni toxicité aiguë à 0,7 mg/kg. En combinaison avec le LY188011, ce produit chimique augmente significativement l'apoptose et inhibe la croissance tumorale dans le cas d'une tumeur orthotopique, alors que les deux monothérapies n'y parvenaient pas. [11]

• Essai MLCK

  L'activité de la MLCK est testée avec un substrat peptidique (KKRPQRATSNVFS-NH₂) ou la chaîne légère de la myosine. Le substrat peptidique (24 μM) est phosphorylé dans un mélange réactionnel contenant 25 mM Tris-HC1 (pH 7,5), 0,5 mg/mL d'albumine sérique bovine, 4 mM de MgCl₂, 0,5 mM de CaCl₂, 2,6 nM de calmoduline, 1,5 nM de MLCK et 400 μM d'ATP dans un volume final de 0,25 mL. Après une préincubation de 10 min à 28 °C sans ATP, la réaction est démarrée par addition d'ATP à 28 °C et terminée par l'addition de 0,1 mL d'acide acétique à 10 % (v/v) après 30 min. Le mélange est analysé par chromatographie liquide haute performance : colonne, Unisil Pack 5C18 4,6 X 150 mm ; solvant, 18 % (v/v) d'acétonitrile, 0,1 % (v/v) d'acide trifluoroacétique dans l'eau ; débit, 1,0 mL/min ; température, 40 °C ; détection, absorbance à 220 nm. Le pourcentage de réaction est calculé à partir du rapport des aires de pic de la forme phosphorylée à celles de la forme non phosphorylée. L'activité spécifique mesurée dans les conditions décrites ci-dessus est de 0,81 μmol/min/mg. La chaîne légère de la myosine (108 μg/mL) est phosphorylée dans un mélange réactionnel contenant 25 mM Tris-HC1 (pH 7,5), 0,5 mg/mL d'albumine sérique bovine, 4 mM de MgCl₂, 0,5 mM de CaCl₂, 4,2 nM de calmoduline, 0,92 nM d'enzyme et 10 μM de [γ-³²P]ATP (100-900 cpm/pmol) dans un volume final de 0,25 mL. Après une préincubation de 3 min à 30 °C sans ATP, la réaction est démarrée par l'addition de [γ-³²P]ATP à 30 °C et arrêtée par l'addition de 0,125 mL d'acide trichloroacétique après 5 min. Les matériaux précipitables à l'acide sont collectés sur un filtre à membrane en nitrocellulose et lavés avec quatre aliquotes de 1 mL d'acide trichloroacétique à 5 % (v/v). La radioactivité sur le filtre est mesurée dans un fluide de scintillation au toluène, à l'aide d'un spectromètre à scintillation liquide Packard Tri-Carb modèle 4530. L'activité spécifique mesurée dans ces conditions est de 1,23 μmol/min/mg. [1]

• Lignées cellulaires

  NK cells

• Concentrations

  1 μM

• Temps dincubation

  1 h

• Méthode

  Primary NK cells were pretreated with wortmannin (1 μM) for 1 h, washed twice with RPMI 1640, and then treated with IL-15 (10 ng/mL) for 24 h. DMSO was used as control.

• Modèles animaux

  Human pancreatic adenocarcinoma cells PK1 are injected both s.c. and orthotopically into SCID mice.

• Posologies

  0.175, 0.35, and 0.7 mg/kg

• Administration

  Injected by i.v.