WYE-687

N° de catalogueS2668 Lot :S266801

Données techniques

Formule	C₂₈H₃₂N₈O₃
Poids moléculaire	528.61	Numéro CAS	1062161-90-3
Solubilité (25°C)*	In vitro	5%TFA	3.04 mg/mL (5.75 mM)
		DMSO	0.5 mg/mL (0.94 mM)
		Water	Insoluble
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble. * Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre. * Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

WYE-687 est un inhibiteur ATP-compétitif et sélectif de mTOR avec une IC50 de 7 nM ; ce composé bloque mTORC1/pS6K(T389) et mTORC2/P-AKT(S473) mais aucun effet n'est observé sur P-AKT(T308). La sélectivité pour mTOR est supérieure à celle pour PI3Kα (>100 fois) et PI3Kγ (>500 fois).

Cibles

mTOR

7 nM

In vitro

Le test de kinase à complexe immun montre que le substrat spécifique de mTORC2, His6-AKT, ou le substrat de mTORC1, His6-S6K, est inhibé de manière dose-dépendante par WYE-687. Ce composé inhibe globalement la signalisation mTOR et la fonction AKT dans les modèles cellulaires de manière dose-dépendante. Il inhibe profondément la synthèse protéique dépendante de la coiffe et globale dans les cellules MDA361, cellules de cancer du sein humain. Ce produit chimique montre des effets antiprolifératifs dans diverses lignées cellulaires cancéreuses impliquant un arrêt du cycle cellulaire G1 et une apoptose sélective. Il régule à la baisse les facteurs angiogéniques, VEGF et HIF-1α, dans les cellules U87MG, MDA361 et LNCap.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Format DELFIA de FLAG-TOR purifié Les dosages de routine avec FLAG-TOR purifié (FL et 3.5) sont réalisés dans des plaques à 96 puits comme suit. Les enzymes sont d'abord diluées dans un tampon de dosage de kinase (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycérophosphate, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 μM microcystine LR et 100 μg/mL BSA). Dans chaque puits, 12 μL de l'enzyme diluée sont mélangés brièvement avec 0.5 μL d'inhibiteur test ou de véhicule de contrôle diméthylsulfoxyde (DMSO). La réaction kinase est initiée en ajoutant 12.5 μL de tampon de dosage kinase contenant de l'ATP et du His6-S6K pour obtenir un volume de réaction final de 25 μL contenant 800 ng/mL de FLAG-TOR, 100 μM d'ATP et 1.25 μM de His6-S6K. La plaque de réaction est incubée pendant 2 heures (linéaire entre 1 et 6 heures) à température ambiante avec une agitation douce, puis la réaction est arrêtée en ajoutant 25 μL de tampon d'arrêt (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA et 20 mM EGTA). La détection DELFIA du His6-S6K phosphorylé (Thr-389) est réalisée à température ambiante en utilisant un anticorps monoclonal anti-P(T389)-p70S6K (1A5) marqué avec de l'Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu par anticorps). Quarante-cinq microlitres du mélange réactionnel kinase arrêté sont transférés dans une plaque MaxiSorp contenant 55 μL de PBS. Le His6-S6K est laissé se fixer pendant 2 heures, après quoi les puits sont aspirés et lavés une fois avec du PBS. Cent microlitres de tampon DELFIA avec 40 ng/mL d'anticorps Eu-P(T389)-S6K sont ajoutés. La liaison de l'anticorps est poursuivie pendant 1 heure avec une agitation douce. Les puits sont ensuite aspirés et lavés quatre fois avec du PBS contenant 0.05 % de Tween 20 (PBST). Cent microlitres de solution d'amélioration DELFIA sont ajoutés à chaque puits et les plaques sont lues dans un lecteur de plaques modèle PerkinElmer Victor. Les données obtenues sont utilisées pour calculer l'activité enzymatique et l'inhibition enzymatique par des inhibiteurs potentiels.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells Concentrations 0-100 μM Temps dincubation 24 or 48 hours Méthode For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Test kinase :^{^[1]}

Format DELFIA de FLAG-TOR purifié
Les dosages de routine avec FLAG-TOR purifié (FL et 3.5) sont réalisés dans des plaques à 96 puits comme suit. Les enzymes sont d'abord diluées dans un tampon de dosage de kinase (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycérophosphate, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 μM microcystine LR et 100 μg/mL BSA). Dans chaque puits, 12 μL de l'enzyme diluée sont mélangés brièvement avec 0.5 μL d'inhibiteur test ou de véhicule de contrôle diméthylsulfoxyde (DMSO). La réaction kinase est initiée en ajoutant 12.5 μL de tampon de dosage kinase contenant de l'ATP et du His6-S6K pour obtenir un volume de réaction final de 25 μL contenant 800 ng/mL de FLAG-TOR, 100 μM d'ATP et 1.25 μM de His6-S6K. La plaque de réaction est incubée pendant 2 heures (linéaire entre 1 et 6 heures) à température ambiante avec une agitation douce, puis la réaction est arrêtée en ajoutant 25 μL de tampon d'arrêt (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA et 20 mM EGTA). La détection DELFIA du His6-S6K phosphorylé (Thr-389) est réalisée à température ambiante en utilisant un anticorps monoclonal anti-P(T389)-p70S6K (1A5) marqué avec de l'Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu par anticorps). Quarante-cinq microlitres du mélange réactionnel kinase arrêté sont transférés dans une plaque MaxiSorp contenant 55 μL de PBS. Le His6-S6K est laissé se fixer pendant 2 heures, après quoi les puits sont aspirés et lavés une fois avec du PBS. Cent microlitres de tampon DELFIA avec 40 ng/mL d'anticorps Eu-P(T389)-S6K sont ajoutés. La liaison de l'anticorps est poursuivie pendant 1 heure avec une agitation douce. Les puits sont ensuite aspirés et lavés quatre fois avec du PBS contenant 0.05 % de Tween 20 (PBST). Cent microlitres de solution d'amélioration DELFIA sont ajoutés à chaque puits et les plaques sont lues dans un lecteur de plaques modèle PerkinElmer Victor. Les données obtenues sont utilisées pour calculer l'activité enzymatique et l'inhibition enzymatique par des inhibiteurs potentiels.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells
Concentrations
0-100 μM
Temps dincubation
24 or 48 hours
Méthode
For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Références

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=WYE-687

Validation du produit par le client

: , , J Hepatol, 2016, 64(3):609-17.

Sellecks WYE-687 A été cité par 1 Publication

Laminin-332 sustains chemoresistance and quiescence as part of the human hepatic cancer stem cell niche [Govaere O, et al. J Hepatol, 2015, 10.1016/j.jhep.2015.11.011]	PubMed: 26592953

Laminin-332 sustains chemoresistance and quiescence as part of the human hepatic cancer stem cell niche [Govaere O, et al. J Hepatol, 2015, 10.1016/j.jhep.2015.11.011]

PubMed: 26592953

POLITIQUE DE RETOUR
La politique de retour inconditionnelle de Selleck Chemical garantit une expérience dachat en ligne fluide à nos clients. Si vous nêtes en aucun cas satisfait de votre achat, vous pouvez retourner tout article dans les 7 jours suivant sa réception. En cas de problèmes de qualité du produit, quil sagisse de problèmes liés au protocole ou au produit, vous pouvez retourner tout article dans les 365 jours suivant la date dachat initiale. Veuillez suivre les instructions ci-dessous lors du retour des produits.

EXPÉDITION ET STOCKAGE
Les produits Selleck sont transportés à température ambiante. Si vous recevez le produit à température ambiante, soyez assuré que le service dinspection de la qualité de Selleck a mené des expériences pour vérifier que le placement à température normale pendant un mois naffectera pas lactivité biologique des produits en poudre. Après réception, veuillez stocker le produit conformément aux exigences décrites dans la fiche technique. La plupart des produits Selleck sont stables dans les conditions recommandées.

NON DESTINÉ À UN USAGE HUMAIN, VÉTÉRINAIRE DIAGNOSTIQUE OU THÉRAPEUTIQUE.