Zotarolimus (ABT-578)

Le Zotarolimus (ABT-578) est un analogue semi-synthétique de la rapamycine, fabriqué en substituant un cycle tétrazole au groupe hydroxyle natif en position 42 de la rapamycine. Ce composé est très efficace pour inhiber la prolifération des cellules musculaires lisses et des cellules endothéliales, avec des valeurs d'IC50 de 2,9 nM et 2,6 nM, respectivement. [1] Il est mécaniquement similaire au sirolimus en ayant une liaison à haute affinité à l'immunophiline FKBP12 et une puissance comparable pour inhiber la prolifération in vitro des lymphocytes T humains et de rat. Le Zotarolimus inhibe la prolifération des lymphocytes T humains et de rat induite par la Con A avec des IC50 de 7,0 nM et 1337 nM respectivement. [2]

Le Zotarolimus (ABT-578) réduit efficacement la formation de néointima dans un modèle porcin bien caractérisé de resténose de l'artère coronaire de 28 jours. Il semble efficace pour prévenir l'épaississement néointimal, réduisant la perte tardive de 1,03 à 0,62 mm avec une réduction de 47% du TVF par rapport aux stents métalliques nus (15,4% avec le stent Driver à 8,1% avec le stent Endeavor). [1] Ce composé est efficace pour supprimer le DTH adjuvant, l'EAE et le rejet d'allogreffe cardiaque avec des valeurs d'ED50 de 1,72, 1,17 et 3,71 mg/kg/jour, respectivement. [2]

• Affinité de liaison à FKBP12

  Les plaques de microtitration à 96 puits sont d'abord revêtues de la protéine de fusion FKBP-12 CMP-KDO synthétase à 10 μg/mL, 100 μL/puits pendant 2-3 h, suivi de l'ajout de 50 μL/puits de tampon A (2 % BSA et 0,2 % Tween-20 dans du D-PBS) pendant 30-60 min. Les plaques de microtitration sont ensuite lavées trois fois avec le tampon B (0,2 % Tween dans du D-PBS, pH ajusté à 7,4). Cinquante microlitres de tampon A (pour le maximum), 20 μM de FK506 dans le tampon A (pour le fond), ou diverses concentrations de Zotarolimus (ABT-578) (10 pM-1 μM) dans le tampon A sont ajoutés à chaque puits, suivi de l'ajout de 50 μL de A-79397 (un analogue du FK506)-conjugué de phosphatase alcaline dans le tampon A. Les plaques de microtitration sont incubées à température ambiante pendant 2-2,5 h, suivies de trois lavages avec le tampon B. Environ 100 μL de pNPP (p-nitrophényl-phosphate) dans 0,1 M d'aminométhylpropanol sont ajoutés à chaque puits et les plaques sont incubées à température ambiante pendant 90-120 min. L'absorbance à 405 nM est lue à l'aide d'une plaque ELISA

• Lignées cellulaires

  Human coronary artery cells

• Concentrations

  ~1 μM

• Temps dincubation

  5 days

• Méthode

  Cell proliferation is assayed by measuring tritiated thymidine incorporation in vitro. Human coronary artery cells (hCa) are seeded into tissue culture flasks for expansion and applied to 96-well plates at desired density in complete media (5000 hCaSMC; 10 000 hCaEC). After 2 days, complete media is replaced with incomplete media to synchronize cells and induce G0 state. Two days later, incomplete media are removed and replaced with complete media (serum/growth factors) to induce G0 to G1 transition. Complete media also contain Zotarolimus (ABT-578) at desired concentrations to determine its effects on cell proliferation. On day 7, ³H-thymidine is added to cells to monitor DNA synthesis, and cells are harvested after overnight incorporation of radioactivity. After an incubation period of 72 h, 25 μL (1 μCi/well) of ³H-thymidine are added to each well. The cells are incubated at 37°C for 16-18 h to allow for incorporation of ³H-thymidine into newly synthesized DNA and the cells harvested onto 96-well plates containing bonded glass fibre filters . The filter plates are air-dried overnight, MicroScint-20 (25 μL) added to each filter well and counted. Drug activity is determined by the inhibition of ³H-thymidine incorporation into newly synthesized DNA relative to cells grown in complete media.

• Modèles animaux

  Male Sprague-Dawley rats

• Posologies

  2.5 mg/kg

• Administration

  intravenous or oral