Name: OSI-027
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S2624
Rating: 5 (40 reviews)

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Contrôle qualité

Lot : Pureté : 99.19%

99.19

Cibles apparentées	PI3K Akt GSK-3 ATM/ATR DNA-PK AMPK PDPK1 PTEN PP2A PDK
Autre mTOR Inhibiteurs	Torin 1 Torin 2 AZD8055 Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669) Sapanisertib (MLN0128, INK-128) Torkinib (PP242) MHY1485 Vistusertib (AZD2014) KU-0063794 WYE-354

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail

Lignées cellulaires	Type dessai	Temps dincubation	Description de lactivité
human SQ20B cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human SQ20B cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=1.3 μM
human Caki1 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human Caki1 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=1.9 μM
human SKHEP1 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human SKHEP1 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=3.2 μM
human DU145 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human DU145 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=4.1 μM
human HCT116 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HCT116 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.6 μM
human ColoR cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human ColoR cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.8 μM
human COLO205 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human COLO205 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.8 μM
human OVCAR3 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human OVCAR3 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=8.1 μM
human HOP62 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HOP62 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=41 μM
human COLO205 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human COLO205 cells after 72 hrs by MTT assay
human HOP62 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HOP62 cells after 72 hrs by MTT assay
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Informations chimiques, stockage et stabilité

Poids moléculaire	406.44	Formule	C₂₁H₂₂N₆O₃	Stockage (À partir de la date de réception)	3 ans-20°Cpoudre
N° CAS	936890-98-1	Télécharger le SDF		Stockage des solutions mères	1 an-80°Cen solvant 1 mois-20°Cen solvant
Synonymes	ASP4786, CERC 006, AEVI-006			Smiles	COC1=CC=CC2=C1NC(=C2)C3=C4C(=NC=NN4C(=N3)C5CCC(CC5)C(=O)O)N

Solubilité

In vitro
Lot:

DMSO : 18 mg/mL (44.28 mM)
(Le DMSO contaminé par lhumidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse	Concentration	Volume	Poids moléculaire
=	×	×

Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo Lot:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Entrez les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant lexpérience)

Dosage : mg/kg Poids moyen des animaux : g Volume de dosage par animal :μL Nombre danimaux :

Étape 2 : Entrez la formulation in vivo (Ceci nest que le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter dabord sil ny a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter dabord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, ajouter ensuiteμL PEG300, mélanger et clarifier, ajouter ensuiteμL Tween 80, mélanger et clarifier, ajouter ensuite μL ddH₂O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, ajouter ensuite μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Remarque : 1. Assurez-vous que le liquide est clair avant dajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous dajouter le(s) solvant(s) dans lordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue lors de lajout précédent est une solution claire avant de procéder à lajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme daction

Targets/IC₅₀/Ki	mTOR (Cell-free assay) 4 nM mTORC1 (Cell-free assay) 22 nM mTORC2 (Cell-free assay) 65 nM PI3Kγ (Cell-free assay) 0.42 μM
In vitro	OSI-027 présente des activités d'inhibition sélectives et compétitives de l'ATP contre mTORC1 et mTORC2 avec une IC50 de 22 nM et 65 nM, respectivement. De plus, ce composé inhibe la signalisation mTOR de phospho-4E-BP1 avec une IC50 de 1 R M dans des essais cellulaires. Il présente des activités antiprolifératives contre plusieurs lignées cellulaires de leucémie aiguë d'origine myéloïde/mégacaryocytaire de manière dose-dépendante, y compris les cellules U937, KG-1, KBM-3B, ML-1, HL-60 et MEG-01. Une étude récente montre que l'inhibition de mTORC1/2 par cette substance chimique supprime efficacement la phosphorylation d'Akt (S473) et la prolifération cellulaire dans les cellules de cancer du sein.
Kinase Assay	Essais biochimiques
Kinase Assay	L'inhibition de mTORC1 et mTORC2 est mesurée à l'aide d'un complexe enzymatique natif immunoprécipité à partir de lysats de HeLa à 1 mM d'ATP. Pour préparer des lysats cellulaires entiers à partir de cellules HeLa, 25 g de culot cellulaire sont lysés dans 60 mL de tampon A glacé [40 mM HEPES (pH 7,5), 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM pyrophosphate de sodium, 10 mM glycérophosphate, 50 mM NaF, 0,5 mM orthovanadate et inhibiteurs de protéase sans EDTA contenant 0,3 % de CHAPS] pendant 30 minutes sur un agitateur magnétique dans une chambre froide. Après élimination des lysats par centrifugation à 13 000 g pendant 10 minutes, des plaques à 384 puits revêtues de protéine G sont incubées avec 0,25 R g d'anticorps mTOR dans 15 R L de tampon A pendant 1 heure à 4 R C. À chaque puits, 40 R g de lysat de cellules HeLa dans 15 R L de tampon A sont ajoutés et incubés pendant une nuit à 4 R C pour immunoprécipiter les complexes mTOR. Les plaques sont lavées 3 fois avec le tampon A et deux fois avec le tampon de lavage d'immunoprécipitation [Tampon B : 50 mM HEPES (pH 7,5) et 150 mM NaCl]. OSI-027 est ajouté à une concentration de 10 R M à chaque puits et le DMSO est ajouté aux puits de contrôle. La réaction est lancée en ajoutant 150 ng de 4E-BP1 marqué His comme substrat en présence ou en l'absence de 100 R M d'ATP à chaque puits dans 25 R L de tampon kinase fraîchement préparé [Tampon C : 20 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 4 mM MnCl₂, 10 mM R -mercaptoéthanol et 200 R M de vanadate] et incubée à température ambiante (TA) pendant 30 minutes. La réaction est arrêtée en transférant 25 R L de mélange réactionnel de chaque puits vers les puits correspondants de nouvelles plaques revêtues de chélate de nickel et incubées pendant une nuit à 4 R C, suivies de 2 heures à 37 R C. Pour détecter la phosphorylation de 4E-BP1, les plaques sont lavées une fois avec du TBST (solution saline tamponnée au Tris contenant 0,1 % de Tween-20) contenant 5 % de lait écrémé en poudre. À chaque puits, 25 R L d'anticorps phospho-4E-BP1 dilués au 1:1 000 dans du TBST contenant 5 % de lait écrémé sont ajoutés et incubés pendant 1 heure à TA. Les plaques sont lavées une fois avec du TBST, puis 25 R L d'HRP anti-lapin (dilué au 1:10 000) dans du TBST contenant 5 % de lait écrémé sont ajoutés. Les plaques sont incubées pendant 1 heure à TA et lavées 5 fois avec du TBST. Pour la détection de phospho-4E-BP1, 25 R L de réactifs chimioluminescents A+B sont ajoutés et la chimioluminescence est mesurée à l'aide d'un lecteur de plaques Analyst.
In vivo	Dans le xénogreffe colorectal GEO, OSI-027 (65 mg/kg) inhibe les effecteurs mTORC1 et mTORC2, y compris la phosphorylation de 4E-BP1, Akt et S6. De plus, l'inhibition combinée de mTORC1 et mTORC2 par ce composé inhibe plus puissamment la croissance tumorale que l'inhibition de mTORC1 par la rapamycine.
Références	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21363918/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21415215/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22476852/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21673091/

Applications

Méthodes	Biomarqueurs	PMID
Western blot	p-mTOR / mTOR / p-AKT / AKT / p-P70S6K / P70S6K / p-4EBP1 / 4EBP1	26026051
Immunofluorescence	LC3	24610825
Growth inhibition assay	Cell viability	25823922