Opaganib (ABC294640) SPHK inhibiteur

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Contrôle Qualité

Lot : Pureté : 99.73%

99.73

Cibles apparentées	PD-1/PD-L1 CXCR STING AhR Immunology & Inflammation related CD markers Interleukins Anti-infection Antioxidant COX
Autre SPHK Inhibiteurs	PF-543 hydrochloride SKI II K6PC-5 Defensamide (MHP) SKI-V SKI-178

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail

Lignées cellulaires	Type dessai	Temps dincubation	Description de lactivité	PMID
Sf9	Function assay		Inhibition of human recombinant SphK2 expressed in Sf9 cells assessed as radiolabeled products using 10 uM sphingosine and 10 uM gamma[32P]ATP by liquid scintillation counting, Ki=9.8μM	25643074
Sf9	Function assay	2 hrs	Inhibition of recombinant human full-length N-terminal His-tagged SK2 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells using NBD-Sph as substrate measured after 2 hrs by fluorescence based HPLC analysis, Ki=9.8μM	30889352
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Informations chimiques, stockage et stabilité

Poids moléculaire	380.91	Formule	C₂₃H₂₅ClN₂O	Stockage (À compter de la date de réception)	3 ans-20°Cpoudre
N° CAS	915385-81-8	Télécharger le SDF		Stockage des solutions mères	1 an-80°Cen solvant 1 mois-20°Cen solvant
Synonymes	N/A			Smiles	C1C2CC3(CC1CC(C2)(C3)C(=O)NCC4=CC=NC=C4)C5=CC=C(C=C5)Cl

Solubilité

In vitro
Lot:

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Le DMSO contaminé par lhumidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse	Concentration	Volume	Poids moléculaire
=	×	×

Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo Lot:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	10%DMSO 1 40%PEG300 2 5%TWEEN80 3 45%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	24.000mg/ml (63.01mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 100 μL of 240 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 450 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Saisir les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant lexpérience)

Dosage : mg/kg Poids moyen des animaux : g Volume de dosage par animal :μL Nombre danimaux :

Étape 2 : Saisir la formulation in vivo (Ceci est seulement le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter dabord sil ny a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter dabord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouterμL PEG300, mélanger et clarifier, puis ajouterμL Tween 80, mélanger et clarifier, puis ajouter μL ddH₂O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouter μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Note : 1. Veuillez vous assurer que le liquide est clair avant dajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous dajouter le(s) solvant(s) dans lordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue, lors de lajout précédent, est une solution claire avant de procéder à lajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie chaud peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme daction

Targets/IC₅₀/Ki	SphK2 (Cell-free assay) 60 μM
In vitro	Opaganib (ABC294640) modifie de manière significative le rapport céramide/S1P, ce qui est cohérent avec l'inhibition de l'activité SK dans les cellules MDA-MB-231. Il inhibe la prolifération des cellules tumorales avec des valeurs d'IC50 allant d'environ 6 à 48 μM, et altère la migration des cellules tumorales concomitamment à la perte de microfilaments. Ce composé induit une mort cellulaire non apoptotique, des changements morphologiques dans les lysosomes, la formation d'autophagosomes et une augmentation des vésicules acides dans les cellules A-498, PC-3 et MDA-MB-231. Dans les cellules MCF-7 et les cellules HEK293 transfectées avec ER, il diminue l'activité ERE-luciférase stimulée par E2.
Essai kinase	Essais de la sphingosine kinase
Essai kinase	Les valeurs d'IC50 pour Opaganib (ABC294640) et DMS sont déterminées par un nouveau test d'activité SK basé sur la HPLC. En bref, les composés testés sont incubés avec la SK1 ou SK2 recombinante et NBD-Sph dans les tampons d'essai sélectifs aux isozymes détaillés ci-dessous, avec 1 mg/ml d'albumine sérique bovine sans acide gras, 100 μM d'ATP et 400 μM de MgCl₂. Le produit, c'est-à-dire le NBD-S1P, est séparé du NBD-Sph par HPLC comme suit : système HPLC Waters 2795 avec un détecteur de fluorescence Waters 2495, colonne C8 Chromolith RP-8e (100 × 4,6 mm), phase mobile de 1 ml/min (acétonitrile/tampon phosphate de sodium 20 mM, pH 2,5, à 45:55). La fluorescence est surveillée avec une excitation à 465 nm et une émission à 531 nm. Le rapport NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) est utilisé comme mesure de l'activité SK. Les tampons d'essai sélectifs aux isozymes SK contenaient chacun 20 mM Tris, pH 7,4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-mercaptoéthanol, 5 % de glycérol, 1× inhibiteurs de protéase et 1× inhibiteurs de phosphatase. Pour le tampon d'essai SK1, 0,25 % (final) de Triton X-100 est ajouté ; et pour le tampon SK2, 1 M (final) de KCl est ajouté. Les essais sont réalisés pendant 2 h à température ambiante, puis un volume de méthanol de 1,5 est ajouté pour arrêter la réaction de la kinase. Après 10 min, les échantillons sont centrifugés à 20 000 g pour culoter la protéine précipitée, et les surnageants sont analysés par HPLC. Dans les expériences visant à déterminer le Ki pour l'inhibition de la SK2 par ce composé, le système de dosage ADP Quest est utilisé pour mesurer l'activité de la kinase en présence de concentrations variables de sphingosine et de celui-ci. Pour déterminer les effets d'Opaganib sur l'activité cellulaire de la SK, des cellules MDA-MB-231 quasi-confluentes sont privées de sérum pendant une nuit, puis traitées avec des concentrations variables de celui-ci. Les cellules sont ensuite incubées avec de la [³H]sphingosine à une concentration finale de 1 μM. Les cellules absorbent la sphingosine exogène, qui est convertie en S1P via l'activité de la SK, et la [³H]S1P est séparée de la [³H]sphingosine par extraction et quantifiée par comptage par scintillation.
In vivo	Opaganib (ABC294640) réduit significativement la croissance tumorale chez les souris porteuses de xénogreffes d'adénocarcinome mammaire, associée à une déplétion des niveaux de S1P. Chez les souris immunodéficientes combinées sévères (SCID) porteuses de xénogreffes A-498, il retarde la croissance tumorale et élève les marqueurs d'autophagie. Ce composé protège également contre l'inflammation induite par la transplantation hépatique et la diaphonie entre les immunités innée et adaptative, événements majeurs qui précipitent et exacerbent les lésions du greffon, et améliore la fonction hépatique et la survie.
Références	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20061445/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20179157/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20861237/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Applications

Méthodes	Biomarqueurs	Images	PMID
Western blot	c-Myc pRb / Rb H3K9ac / p21 p-STAT3 / STAT3		27517489
Growth inhibition assay	Cell proliferation		25122609

Informations sur lessai clinique

(données du https://clinicaltrials.gov, mis à jour le 2024-05-22)

Numéro NCT	Recrutement	Conditions	Promoteur/Collaborateurs	Date de début	Phases
NCT02939807	Withdrawn	Carcinoma Hepatocellular	Medical University of South Carolina\|National Cancer Institute (NCI)\|Apogee Biotechnology Corporation	September 30 2019	Phase 2
NCT03377179	Completed	Cholangiocarcinoma\|Cholangiocarcinoma Non-resectable\|Cholangiocarcinoma Perihilar\|Cholangiocarcinoma Extrahepatic\|Cholangiocarcinoma Intrahepatic	RedHill Biopharma Limited	March 7 2018	Phase 2
NCT02757326	Terminated	Multiple Myeloma	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Duke University\|National Cancer Institute (NCI)	December 13 2016	Phase 1\|Phase 2
NCT02229981	Withdrawn	Diffuse Large B Cell Lymphoma\|Kaposi Sarcoma	RedHill Biopharma Limited\|Louisiana State University Health Sciences Center in New Orleans\|Apogee Biotechnology Corporation	July 2014	Phase 1\|Phase 2
NCT01488513	Completed	Pancreatic Cancer\|Unspecified Adult Solid Tumor Protocol Specific	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Medical University of South Carolina\|FDA Office of Orphan Products Development\|National Cancer Institute (NCI)	August 2011	Phase 1

Support technique

Instructions de manipulation

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Si vous avez dautres questions, veuillez laisser un message.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):

Structure chimique

Poids moléculaire: 380.91