PIK-93 PI4K inhibiteur

A novel and potent inhibitor of both PI3Kγ and PI4KIIIβ.

PIK-93 inhibe PI3Kγ et PI4KIIIβ, avec des valeurs d'IC50 de 16 nM et 19 nM, respectivement. Ce composé inhibe également d'autres membres des PI3Ks, y compris PI3Kα, β et δ, avec des valeurs d'IC50 de 39 nM, 0,59 μM et 0,12 μM, respectivement. Il ne montre aucun effet inhibiteur évident contre un panel d'autres kinases, même à une concentration de 10 μM. [1] Dans les cellules HL60 différenciées (dHL60), ce composé (0,5 μM–1 μM) altère la consolidation et la stabilité du bord d'attaque formé après traitement avec du f-Met-Leu-Phe (fMLP) uniforme. Il modifie la localisation, mais pas la quantité, de l'accumulation fMLP-dépendante d'actine F totale. Dans les gradients de fMLP, ce produit chimique réduit l'indice chimiotactique et triple la fréquence de virage des cellules. [2] Dans les cellules COS-7, ce composé (250 nM) abroge efficacement l'accumulation du domaine CERT-PH et de FL-Cer dans le Golgi. À la même concentration, il inhibe également significativement la conversion de céramide endogène marqué au [³H]sérine en sphingomyéline. Ces faits indiquent un rôle clé de PI4KIIIβ dans le transport du céramide entre le RE et le Golgi, ainsi que dans la régulation de la synthèse de la sphingomyéline. [3] Dans les cellules T6.11, ce composé (300 nM) réduit la translocation de TRPC6 vers la membrane plasmique induite par le carbachol et l'entrée nette de Ca²⁺. [4] Un rapport récent montre que ce produit chimique a des effets anti-entérovirus, comme le révèle son inhibition de la réplication du poliovirus (PV) et du virus de l'hépatite C (VHC), avec des valeurs d'EC50 de 0,14 µM et 1,9 µM, respectivement. [5]

Dosage des PI3K

Les valeurs d'IC50 sont mesurées à l'aide d'un dosage TLC standard pour l'activité lipidique kinase. Les réactions de kinase sont effectuées en préparant un mélange réactionnel contenant la kinase, PIK-93 (2% de DMSO concentration finale), un tampon (25 mM HEPES, pH 7.4, 10 mM MgCl₂) et du phosphatidylinositol fraîchement sonicé (100 µg/ml). Les réactions sont initiées par l'ajout d'ATP contenant 10 µCi de γ-³²P-ATP à une concentration finale de 10 ou 100 µM, et sont laissées à se dérouler pendant 20 min à température ambiante. Pour l'analyse TLC, les réactions sont ensuite terminées par l'ajout de 105 µL de HCl 1N suivi de 160 µL de CHCl₃:MeOH (1:1). Le mélange biphasique est vortexé, brièvement centrifugé, et la phase organique est transférée dans un nouveau tube à l'aide d'une pointe de pipette de chargement de gel pré-enduite de CHCl₃. Cet extrait est déposé sur des plaques de TLC et développé pendant 3 heures–4 heures dans une solution 65:35 de n-propanol:acide acétique 1M. Les plaques de TLC sont ensuite séchées, exposées à un écran de phosphorimagerie et quantifiées. L'activité kinase est typiquement mesurée à 10–12 concentrations de ce composé représentant des dilutions de deux fois à partir de la concentration la plus élevée de 100 μM.