PIK-93 inhibitor de PI4K

A novel and potent inhibitor of both PI3Kγ and PI4KIIIβ.

PIK-93 inhibe PI3Kγ et PI4KIIIβ, avec des valeurs de CI50 de 16 nM et 19 nM, respectivement. Ce composé inhibe également d'autres membres des PI3Ks, y compris PI3Kα, β et δ, avec des valeurs de CI50 de 39 nM, 0,59 μM et 0,12 μM, respectivement. Il ne montre aucun effet inhibiteur évident contre un panel d'autres kinases, même à une concentration de 10 μM. [1] Dans les cellules HL60 différenciées (dHL60), ce composé (0,5 μM–1 μM) altère la consolidation et la stabilité du bord d'attaque formé après traitement par du f-Met-Leu-Phe (fMLP) uniforme. Il modifie la localisation, mais pas la quantité, de l'accumulation de F-actine totale dépendante du fMLP. Dans les gradients de fMLP, ce produit chimique réduit l'indice chimiotactique et triple la fréquence de retournement des cellules. [2] Dans les cellules COS-7, ce composé (250 nM) supprime efficacement l'accumulation du domaine CERT-PH et de FL-Cer dans l'appareil de Golgi. À la même concentration, il inhibe également de manière significative la conversion du céramide endogène marqué à la [³H]sérine en sphingomyéline. Ces faits indiquent un rôle clé de PI4KIIIβ dans le transport du céramide entre le réticulum endoplasmique et l'appareil de Golgi, ainsi que dans la régulation de la synthèse de la sphingomyéline. [3] Dans les cellules T6.11, ce composé (300 nM) réduit la translocation induite par le carbachol de TRPC6 vers la membrane plasmique et l'entrée nette de Ca²⁺. [4] Un rapport récent montre que ce produit chimique possède des effets anti-entéroviraux, comme le révèle son inhibition de la réplication à la fois du poliovirus (PV) et du virus de l'hépatite C (HCV), avec des valeurs de CE50 de 0,14 µM et 1,9 µM, respectivement. [5]

Dosage des PI3Ks

Les valeurs de CI50 sont mesurées à l'aide d'un essai CCM standard pour l'activité de la kinase lipidique. Les réactions de kinase sont effectuées en préparant un mélange réactionnel contenant de la kinase, PIK-93 (concentration finale de 2 % de DMSO), un tampon (25 mM HEPES, pH 7,4, 10 mM de MgCl₂) et du phosphatidylinositol fraîchement soniqué (100 µg/ml). Les réactions sont initiées par l'ajout d'ATP contenant 10 µCi de γ-³²P-ATP jusqu'à une concentration finale de 10 ou 100 µM, et laissées se dérouler pendant 20 min à température ambiante. Pour l'analyse CCM, les réactions sont ensuite terminées par l'ajout de 105 µL de HCl 1N suivi de 160 µL de CHCl₃:MeOH (1:1). Le mélange biphasique est vortexé, brièvement centrifugé, et la phase organique est transférée dans un nouveau tube à l'aide d'une pointe de pipette de chargement sur gel pré-enduite de CHCl₃. Cet extrait est déposé sur des plaques CCM et développé pendant 3 à 4 heures dans une solution 65:35 de n-propanol:acide acétique 1M. Les plaques CCM sont ensuite séchées, exposées à un écran de phosphorimagerie, et quantifiées. L'activité kinase est généralement mesurée à 10–12 concentrations de ce composé, représentant des dilutions au demi à partir de la concentration la plus élevée de 100 μM.