JC-1 Dyes chimique

1. Prenez la plaque à 6 puits comme exemple pour le placage cellulaire, et la densité est de 5 ×10^5/mL. Incuber une nuit dans un incubateur à 5% de CO2 à 37℃.
Note: il est suggéré que la densité cellulaire pendant l'induction de l'apoptose ne dépasse pas 1 ×10^6/ml, ce qui peut également être cultivé à la densité appropriée selon votre propre type de cellule.
2. Prendre 0,5 mL de suspension dans un tube à centrifuger stérile; centrifugation à 400 g pendant 3-5 min; Jeter le surnageant.
3. Les cellules ont été resuspendues avec 1ml de cette solution de travail compound et incubées dans un incubateur à 5% de CO2 à 37℃ pendant 15-30 min.
4. Centrifugation à température ambiante pendant 5 min à 400 g; Aspirer le surnageant.
5. Les cellules ont été resuspendues avec 2 mL de milieu de culture cellulaire ou de tampon, puis centrifugées à température ambiante pendant 5 min à 400 g; Jeter le surnageant et répéter deux fois.
6. Resuspendre les cellules avec 1 mL de milieu de culture frais ou de tampon, et effectuer immédiatement l'observation ultérieure par cytométrie de flux ou microscope à fluorescence.
7. Analyse des données (cytométrie de flux): les mitochondries des cellules saines contenant des agrégats rouges de cette compound ont été détectées par le canal FL2; Les cellules apoptotiques ou malsaines contenant le monomère vert de cette compound ont été détectées par le canal FL1 (FITC).
8. Si utilisé pour un instrument de marquage enzymatique, utiliser 300 μL de cellules resuspendues dans un tampon; Ensuite, 100 par trou μ Transférer les cellules colorées dans une plaque à 96 puits étanche à la lumière avec la quantité de L, puis effectuer l'analyse de la plaque de marquage enzymatique fluorescente.