AM1241 Cannabinoid Receptor agoniste

AM-1241 est un agoniste protéen du CB2 basé sur les différents effets observés dans diverses études (influx de calcium, phosphorylation de la kinase régulée par le signal extracellulaire (ERK) et mesure de l'AMPc) et sur le passage d'un antagonisme neutre à un agonisme dans l'essai cAMP lorsque la concentration de forskoline est abaissée. Dans les essais de liaison compétitive au [³H]CP 55,940, ce composé affiche une forte affinité pour le récepteur CB2 humain avec une valeur K_i d'environ 7 nM, tandis que son affinité pour le récepteur CB1 humain est plus de 80 fois plus faible, en utilisant des préparations membranaires issues de lignées cellulaires HEK et CHO stables exprimant respectivement les récepteurs CB2 et CB1 humains recombinants. [2]

Essais de liaison

La liaison aux récepteurs cannabinoïdes est testée en utilisant une liaison d'équilibre de compétition vs. [³H]CP55,940. AM-1241 est dilué dans 25 mM Tris base (pH 7,4)/5 mM MgCl₂/1 mM EDTA/0,1% BSA essentiellement sans acide gras et transféré dans des plaques à 96 puits traitées au Regisil. Le [³H]CP55,940 (DuPont_NEN; activité spécifique 100–180 Ci/ mmol; 1 Ci =37 GBq) est ajouté à une concentration de 0,8 nM. Des membranes préparées à partir de cerveau de rat (contenant des récepteurs CB1) ou de rate de souris (contenant des récepteurs CB2) sont ajoutées (≈50 μg de protéine membranaire par puits), les plaques sont incubées à 30 °C pendant 1 heure, et le contenu est filtré sur des filtres Packard Unifilter GF/B à 96 puits à l'aide d'un collecteur de cellules Packard Filtermate 196. Les filtres sont lavés avec 50 mM Tris base/5 mM MgCl₂/0,5% BSA glacé et séchés. La radioactivité liée est quantifiée et corrigée pour la liaison non spécifique, et les résultats sont normalisés entre 0% et 100% de [³H]CP-55,940 spécifiquement lié. L'IC50 est déterminée par analyse de régression non linéaire à l'aide de GraphPad PRISM et transformée en valeur Ki. Toutes les données sont recueillies en double. Les valeurs IC50 et Ki sont déterminées à partir de trois expériences indépendantes.

AM-1241 inverse de manière dose-dépendante l'hypersensibilité tactile et thermique produite par la ligature des nerfs spinaux L5 et L6 chez le rat. Ce composé est également actif pour bloquer l'hypersensibilité tactile et thermique induite par la ligature du nerf spinal chez les souris dépourvues de récepteurs CB1 (souris CB1-/-), confirmant qu'il inverse l'hypersensibilité sensorielle indépendamment des actions sur les récepteurs CB1.[1] Ce produit chimique (100, 330 μg/kg i.p.) supprime le développement de l'hyperalgésie thermique et mécanique et de l'allodynie provoquées par la carragénine. Et cette suppression est bloquée par l'antagoniste CB2 SR144528 mais pas par l'antagoniste CB1 SR141716A. [3] Il produit une antinociception dose-dépendante à un stimulus thermique appliqué à la patte arrière, lorsqu'il est administré dans la patte arrière du côté testé (i.p. ipsilatéral), tandis qu'il est beaucoup moins actif dans la patte controlatérale. L'A50 (dose analgésique produisant un effet de 50%) de ce composé est de 847 μg/kg avec l'effet maximal possible (100% MPE) étant atteint à 3,3 mg/kg. Il produit également une antinociception dose-dépendante lorsqu'il est administré par voie intrapéritonéale (i.p.), avec un A50 de 103 μg/kg. Les actions antinociceptives de ce produit chimique sont bloquées par l'antagoniste sélectif du récepteur CB2 AM630, mais pas par l'antagoniste sélectif du récepteur CB1 AM251. Ce composé ne produit pas les effets cannabinoïdes centraux d'hypothermie, de catalepsie, d'inhibition de l'activité ou d'altération de la déambulation, tandis que cette tétrade d'effets est produite par l'agoniste des récepteurs CB1/CB2 WIN55,212-2.[4] Des injections quotidiennes de ce produit chimique par voie i.p., initiées au début des symptômes, augmentent l'intervalle de survie après le début de la sclérose latérale amyotrophique (SLA) de 56% dans un modèle de souris transgénique de SLA. [5]