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MLN4924 (Pevonedistat) inhibiteur de NAE

Réf. CatalogueS7109

MLN4924 est un inhibiteur à petite molécule de l'enzyme d'activation Nedd8 (NAE) avec un IC50 de 4 nM.
MLN4924 (Pevonedistat) E1 Activating Inhibiteur Chemical Structure

Structure chimique

Poids moléculaire: 443.52

Aller à

Contrôle Qualité (Quality Control)

Lot : Pureté : 99.99%
99.99

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Lignées cellulaires Type d'essai Concentration Temps d'incubation Formulation Description de l'activité PMID
K562 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human K562 cells after 72 hrs by CellTiter-Glo assay, EC50 = 0.108 μM. 24900352
U2OS Antitumor assay 72 hrs Antitumor activity against human U2OS cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 0.16 μM. 28388520
HCT116 Antitumor assay 72 hrs Antitumor activity against human HCT116 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 0.19 μM. 28388520
Caco2 Function assay 16 hrs Inhibition of NAE-mediated Ubcl2-NEDD8 conjugation in human Caco2 cells after 16 hrs by Western blot analysis, EC50 = 3.4 μM. 29232579
Caco2 Function assay 16 hrs Inhibition of NAE-mediated Ubcl2-NEDD8 conjugation in human Caco2 cells after 16 hrs by Western blot analysis, EC50 = 3.4 μM. 29232579
Caco2 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human Caco2 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 4.4 μM. 29232579
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Informations chimiques, stockage et stabilité (Chemical Information, Storage & Stability)

Poids moléculaire 443.52 Formule

C21H25N5O4S

 Stockage (À compter de la date de réception)
N° CAS 905579-51-3 Télécharger le SDF Stockage des solutions mères

Solubilité (Solubility)

In vitro
Lot:

DMSO : 89 mg/mL (200.66 mM)
(Le DMSO contaminé par l'humidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Ethanol : 22 mg/mL

Water : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse Concentration Volume Poids moléculaire
Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo
Lot:

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Saisir les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant l'expérience)

mg/kg g μL

Étape 2 : Saisir la formulation in vivo (Ceci est seulement le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter d'abord s'il n'y a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter d'abord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouterμL PEG300, mélanger et clarifier, puis ajouterμL Tween 80, mélanger et clarifier, puis ajouter μL ddH2O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouter μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Note : 1. Veuillez vous assurer que le liquide est clair avant d'ajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous d'ajouter le(s) solvant(s) dans l'ordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue, lors de l'ajout précédent, est une solution claire avant de procéder à l'ajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie chaud peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme d'action (Mechanism of Action)

Caractéristiques
A mechanism-based inhibitor of NAE, and creates a covalent NEDD8-MLN4924 adduct catalyzed by the enzyme.
Targets/IC50/Ki
NAE
(Cell-free assay)
4 nM
In vitro
Le Pevonedistat (MLN4924) est structurellement lié à l'adénosine 59-monophosphate (AMP) – un produit de liaison étroit de la réaction NAE. Il (3 μM) inhibe sélectivement la NAE dans les lysats de cellules HCT-116 et inhibe le renouvellement global des protéines de <9% dans les cellules HCT-116. Ce composé entraîne une diminution dose-dépendante du thioester Ubc12–NEDD8 et des conjugués NEDD8–cullin avec une IC50 < 0,1 μM dans les cellules HCT-116, entraînant une augmentation réciproque de l'abondance des substrats CRL connus CDT1, p27 et NRF2, mais pas des substrats non-CRL. Il (3 μM) conduit les cellules à s'accumuler en phase S dès 8 heures et entraîne une fraction significative de cellules contenant un contenu d'ADN 4N à 24 heures dans les cellules HCT-116. À la même concentration, il entraîne une accumulation rapide de pIkappaBalpha, une diminution du contenu nucléaire de p65, une réduction de l'activité transcriptionnelle du facteur nucléaire-kappaB (NF-kappaB) et un arrêt en G(1), entraînant finalement l'induction de l'apoptose, des événements compatibles avec une puissante inhibition de la voie NF-kappaB dans les cellules ABC DLBCL. À 1 μM, il déclenche la réplication de l'ADN et inhibe la prolifération cellulaire en stabilisant le facteur de réplication de l'ADN Cdt1, un substrat des cullines 1 et 4. Cette concentration, suffisante pour élever Cdt1 pendant 4-5 heures, est jugée suffisante pour induire la réplication de l'ADN et activer les voies d'apoptose et de sénescence. Le traitement avec ce composé induit les caractéristiques des phénotypes de sénescence comme en témoigne la morphologie cellulaire agrandie et aplatie et la coloration positive de la β-Gal associée à la sénescence. La sénescence induite par MLN4924 est associée à la réponse cellulaire aux dommages à l'ADN, déclenchée par l'accumulation des protéines de licence de l'ADN CDT1 et ORC1, suite à l'inactivation des CRL/SCF E3. Elle est irréversible et couplée à une accumulation persistante de p21 et à une activation soutenue de la réponse aux dommages à l'ADN.
Essai kinase
Dosages enzymatiques d'E1 Activating in vitro
Un format d'essai de transfert d'énergie par fluorescence résolue dans le temps est utilisé pour mesurer l'activité in vitro de la NAE. La réaction enzymatique, contenant 50 μL de 50 mM HEPES, pH 7,5, 0,05 % BSA, 5 mM MgCl2, 20 μM ATP, 250 μM glutathion, 10 nM Ubc12–GST, 75 nM NEDD8–Flag et 0,3 nM d'enzyme NAE humaine recombinante, est incubée à 24 ℃ pendant 90 min dans une plaque à 384 puits, avant d'être arrêtée avec 25 μL de tampon d'arrêt/détection (0,1 M HEPES, pH 7,5, 0,05 % Tween20, 20 mM EDTA, 410 mM KF, 0,53 nM d'anticorps monoclonal spécifique Flag-M2 marqué à l'Europium-Cryptate et 8,125 μg/mL d'anticorps spécifique GST marqué à la PHYCOLINK allophycocyanine (XL-APC)). Après incubation de 2 heures à 24 ℃, la plaque est lue sur l'instrument LJL Analyst HT Multi-Mode en utilisant une méthode de fluorescence résolue dans le temps. Un protocole d'essai similaire est utilisé pour mesurer d'autres enzymes E1.
In vivo
Le Pevonedistat (MLN4924) (60 mg/kg) entraîne une diminution dose- et temps-dépendante des niveaux de NEDD8–cullin dès 30 min après l'administration chez des souris porteuses de tumeurs HCT-116, avec un effet maximal 1 à 2 heures après la dose. Il entraîne également une augmentation dose- et temps-dépendante des niveaux d'équilibre de NRF2 et CDT1 chez les souris porteuses de tumeurs HCT-116. Ce composé entraîne des dommages à l'ADN dans la tumeur, indiqués par l'augmentation des niveaux de CHK1 phosphorylé chez les souris porteuses de tumeurs HCT-116. Lorsqu'il est administré selon un schéma BID à 30 mg/kg et 60 mg/kg, il inhibe la croissance tumorale avec des valeurs T/C de 0,36 et 0,15, respectivement, chez des souris porteuses de xénogreffes HCT-116. Il (60 mg/kg) bloque les biomarqueurs de la voie NAE et entraîne une inhibition complète de la croissance tumorale chez des souris porteuses de tumeurs xénogreffées humaines de ABC- et GCB-DLBCL. Ce composé (60 mg/kg) entraîne une inhibition de la voie NF-kappaB accompagnée de régressions tumorales dans des modèles murins de tumeurs humaines primaires de ABC-DLBCL.
Références
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21677879/

Applications (Applications)

Méthodes Biomarqueurs Images PMID
Western blot Culin 3 / CDT2 / CDT1 / SET8 / p21 / p-p53 / p-CHK1 / p-CHK2 / CHK2 / γH2AX / H2AX / PARP / c-PARP Culin 1 / WEE1 / p27 / p-H3 / cyclin B1 Cleaved caspase-3 / Cleaved PARP pro-apoptotic and anti-apoptotic proteins p-c-Jun / c-Jun p-H2A / p-CHK2 p-AKT / p-mTOR / p-70S6K
S7109-WB1
28838998
Immunofluorescence RhoB / VE-cadherin / F-actin
S7109-IF1
29358211
Growth inhibition assay Cell viability
S7109-viability1
27333051

Informations sur l'essai clinique (Clinical Trial Information)

(données du https://clinicaltrials.gov, mis à jour le 2024-05-22)

Numéro NCT Recrutement Conditions Promoteur/Collaborateurs Date de début Phases
NCT04985656 Withdrawn
Myelodysplastic Syndromes (MDS)
Takeda
 October 1 2021 Phase 2
NCT04800627 Terminated
Locally Advanced Malignant Solid Neoplasm|Metastatic Malignant Solid Neoplasm|Unresectable Malignant Solid Neoplasm
M.D. Anderson Cancer Center
 March 29 2021 Phase 1|Phase 2
NCT04266795 Active not recruiting
Acute Myeloid Leukemia (AML)
Takeda
 October 13 2020 Phase 2
NCT03770260 Completed
Recurrent Multiple Myeloma|Refractory Multiple Myeloma
National Cancer Institute (NCI)
 February 10 2020 Phase 1
NCT04172844 Active not recruiting
Acute Myelogenous Leukemia
Medical College of Wisconsin
 January 13 2020 Phase 1