OSI-930 c-Kit inhibiteur

OSI-930 inhibe la prolifération cellulaire dans la lignée cellulaire HMC-1 avec une IC50 de 14 nM sans effet significatif sur la croissance de la lignée cellulaire COLO-205 qui n'exprime pas de récepteur tyrosine kinase mutant constitutivement actif. De plus, ce composé induit également l'apoptose dans la lignée cellulaire HMC-1 avec une EC50 de 34 nM. [1] Une étude récente montre que ce produit chimique inactive le cytochrome P450 (P450) 3A4 purifié et recombinant avec un K_i de 24 μM de manière dépendante du temps et de la concentration. [2]

Tests de protéine kinase

Les tests de protéine kinase sont effectués en interne par des méthodes d'analyse basées sur ELISA (Kit, KDR, PDGFRα et PDGFRβ) ou par une méthode radiométrique. Les tests ELISA internes utilisaient du poly(Glu:Tyr) comme substrat lié à la surface de plaques d'analyse à 96 puits ; la phosphorylation est ensuite détectée à l'aide d'un anticorps anti-phosphotyrosine conjugué à la HRP. L'anticorps lié est ensuite quantifié à l'aide d'ABTS comme substrat de peroxydase en mesurant l'absorbance à 405/490 nm. Toutes les analyses utilisent des domaines catalytiques de kinase recombinants purifiés qui sont exprimés dans des cellules d'insectes ou dans des bactéries. La protéine Kit et EGFR utilisée pour les analyses internes est préparée en interne ; d'autres enzymes sont obtenues. La protéine recombinante Kit est exprimée sous forme de protéine de fusion glutathion S-transférase NH₂-terminale dans des cellules d'insectes et est initialement purifiée comme une enzyme non phosphorylée (non activée) avec un K_m relativement élevé pour l'ATP (400 μM). Dans certaines analyses, une forme activée (tyrosine phosphorylée) de l'enzyme est préparée par incubation avec 1 mM d'ATP pendant 1 heure à 30 °C. La protéine phosphorylée est ensuite passée à travers une colonne de dessalage pour éliminer la majorité de l'ATP et stockée à -80 °C dans un tampon contenant 50 % de glycérol. La préparation résultante a une activité spécifique considérablement plus élevée et un Km pour l'ATP (25 μM) plus faible que la préparation initiale non phosphorylée. L'inhibition de l'autophosphorylation de Kit par ce composé est testée par incubation de l'enzyme non phosphorylée à 30 °C en présence de 200 μM d'ATP et de diverses concentrations de ce produit chimique. La réaction est arrêtée par le prélèvement d'aliquotes dans un tampon d'échantillon SDS-PAGE suivi d'un chauffage à 100 °C pendant 5 minutes. Le degré de phosphorylation de Kit est ensuite déterminé par immunotransfert pour le Kit total et le Kit phosphorylé.

OSI-930, administré à la dose maximale efficace de 200 mg/kg par gavage oral, présente une activité antitumorale puissante dans un large éventail de modèles de xénogreffes précliniques, y compris les modèles de xénogreffes HMC-1, NCI-SNU-5, COLO-205 et U251. [1]