WYE-125132 (WYE-132) mTOR inhibiteur

A highly potent, ATP-competitive, and specific mTOR kinase inhibitor.

WYE-125132 (WYE-132) inhibe puissamment et de manière ATP-compétitive la kinase mTOR recombinante avec une IC50 de 0,19 nM et montre également une haute sélectivité par rapport à diverses PI3K et un panel de 230 protéines kinases. [1] In vitro, il présente une activité anti-proliférative significative contre un panel de lignées cellulaires tumorales avec une IC50 allant de 2 nM (LNCap) à 380 nM (HTC116). De plus, ce composé provoque également la progression du cycle cellulaire, l'induction de l'apoptose et l'inhibition de la synthèse des protéines et de la taille des cellules. [1] Il entraîne une réduction significative de la synthèse de l'ARNt précurseur^Leu de 72 %, 80 % et 53 % dans les cellules en prolifération active de MG63, MDA361 et HEK293, respectivement, en inhibant mTORC1. De plus, il a été constaté que WYE-125132 induit également la déphosphorylation de Maf1 (régulateur négatif de la transcription de la Pol III) et son accumulation dans le noyau. [2]

Essais de kinase

Les essais enzymatiques de mTOR via le dosage immuno-enzymatique par fluorescence à lanthane améliorée par la dissociation (DELFIA), les dosages matriciels d'ATP et les dosages de la kinase en complexe immunitaire de mTOR sont effectués comme suit pour WYE-125132 (WYE-132). Le TOR endogène du lysat cellulaire LNCap est immunoprécipité par l'anti-FRAP/TOR (N-19). Le lysat cellulaire (1,0 mg) est mélangé avec 4 μg d'anticorps couplés à l'agarose protéine-G/A dans 1 ml de tampon de lyse. Les immunocomplexes sont lavés séquentiellement avec le tampon de lyse, le tampon de lyse plus 500 mM KCl et le tampon de lavage de kinase. Les immunocomplexes sont soumis à une réaction de kinase pendant 30 minutes à 30 °C dans un volume final de 50 μl contenant 10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycérophosphate, et 0,5 μM microcystine LR, 1 mM DTT, 10 mM MnCl₂, 100 μM ATP, 1 μg His6-S6K ou 1 μg His6-4EBP1. Les réactions de kinase (enzymes en complexe immunitaire et purifiées) sont terminées par le tampon d'échantillon NuPAGE LDS et résolues dans un gel NuPAGE Bis-Tris 4-12 % pour Western blotting avec anti-P(T389)-p70S6K et anti-P(T46)-4EBP1, anti-FRAP/TOR (N-19), anti-FLAG M2 et anti-His6 (Clone His-1). Dans le dosage radioactif, 10 μCi [γ-³²P]ATP (3000 Ci/mmol) et 100 μM d'ATP froid sont utilisés. Les produits marqués au ³²P sont résolus par SDS-PAGE et soumis à un autoradiogramme sur des films radiographiques Kodak.

Le WYE-125132 (WYE-132) (5 mg/kg p.o.) produit une activité antitumorale significative et provoque un retard de croissance tumorale dépendant de la dose dans le modèle tumoral MDA361 hyperactif en PI3K/mTOR et HER2. De plus, il montre également une puissante efficacité antitumorale dans les modèles de gliome U87MG sans PTEN, de cancer du poumon non à petites cellules H1975 et A549. [1]