GSK1059615 PI3K inhibiteur

A novel, ATP-competitive, and reversible inhibitor of both PI3Kα, β, δ, and γ, and mTOR.

Le dérivé de pyridinylquinoléine GSK1059615 est un inhibiteur nouveau, ATP-compétitif et réversible de la famille des PI3K de classe I. Ce composé inhibe la signalisation PI3K, induit l'arrêt G1 et l'apoptose, en particulier dans les cellules tumorales du sein. [2] Des données résumées dans une autre revue montrent également que cet inhibiteur inhibe PI3Kα, β, γ et δ, avec des K_i de 0,42 nM, 0,6 nM, 0,47 nM et 1,7 nM, respectivement. [3] Un autre rapport montre que ce produit chimique inhibe PI3Kα avec un IC50 de 2 nM. Dans les cellules cancéreuses T47D et BT474, il inhibe la phosphorylation d'Akt en S473, avec un IC50 de 40 nM. [4]

Tests de profilage in vitro HTRF pour l'inhibition de PI3K

La mesure de l'inhibition des PI3K dépendante du GSK1059615 est effectuée à l'aide d'un kit de dosage de profilage PI3K basé sur HTRF. 400 pM d'enzyme sont utilisés dans les dosages PI3Kα et δ, 200 pM dans les dosages PI3Kβ et 1 nM dans le dosage PI3Kγ. De plus, les dosages PI3Kα, β et δ sont effectués avec 150 mM de NaCl et 100 μM d'ATP, tandis que le dosage PI3Kγ est effectué sans NaCl et avec 15 μM d'ATP. Toutes les réactions sont effectuées à 10 μM de PIP2. Ce composé est dilué en série (3 fois dans du DMSO), et 50 nL sont transférés dans une plaque de dosage à faible volume de 384 puits. Le tampon de réaction PI3K est préparé en diluant la solution mère au 1:4 avec de l'eau déminéralisée. Du DTT fraîchement préparé est ajouté à une concentration finale de 5 mM le jour de l'utilisation. L'ajout d'enzyme et la pré-incubation de ce produit chimique sont initiés par l'ajout de 2,5 µL de PI3K dans le tampon de réaction. Les plaques sont incubées à température ambiante pendant 15 min. Les réactions sont initiées par l'ajout de 2,5 µL de solution de substrat 2× (PIP2 et ATP dans 1× tampon de réaction). Les plaques sont incubées à température ambiante pendant une heure. Les réactions sont stoppées par l'ajout de 2,5 µL de solution d'arrêt. Les réactions stoppées sont ensuite traitées pour détecter la formation du produit en ajoutant 2,5 µL de solution de détection. Après une incubation d'une heure dans l'obscurité, le signal HTRF est mesuré sur le lecteur de plaques Envision réglé pour une excitation à 330 nm et une détection à double émission à 620 nm (Eu) et 665 nm (APC). La valeur de l'IC50 est alors obtenue.

Dans des modèles de xénogreffe de souris de cellules cancéreuses du sein BT474 ou HCC1954, GSK1059615 (25 mg/kg) inhibe efficacement la croissance tumorale. [3]