IC-87114 PI3K inhibiteur

IC-87114 inhibe sélectivement PI3Kδ et n'est pas sensible à PI3Kα, β et γ. Chez les neutrophiles humains, IC87114 (5 µM) inhibe puissamment la biosynthèse du phosphatidylinositol triphosphate (PIP3) et la chimiotaxie stimulées par la N-formyl-méthionyl-leucyl-phénylalanine (fMLP). IC87114 (5 µM) inhibe également la morphologie polarisée et l'étalement des neutrophiles. [1] Chez les cellules blastiques de leucémie myéloïde aiguë (LMA) humaines, telles que les cellules mononucléées de moelle osseuse (BMMC), IC87114 (10 µM) inhibe à la fois la phosphorylation constitutive et stimulée par Flt-3 d'Akt et la prolifération cellulaire. [2] Il a également été constaté que IC87114 (5 µM–30 µM) inhibe les réponses des BMMC stimulées par SCF ou IL-3, qui ne sont pas observées dans les cellules mutantes PI3Kδ (p110δ^D910A). [3] Chez les cellules T CD4⁺ CD62L⁺ (naïves) et CD62L⁻ (effectrices/mémoire) de souris stimulées par anti-CD3, IC87114 inhibe la prolifération et la production d'interféron-gamma (IFN-γ). Les valeurs d'IC50 d'IC87114 sont : (1) 1,2 µM et 40 nM, pour la prolifération des cellules CD62L⁺ et CD62L⁻, respectivement ; (2) 120 nM et 1 nM, pour la production d'IFN-γ des cellules CD62L⁺ et CD62L⁻, respectivement. Des effets similaires d'IC87114 sont également observés dans les cellules T humaines. [4] Une étude récente révèle que dans les cellules chromaffines, IC87114 améliore l'augmentation transitoire de PtdIns(4,5)P2, ce qui entraîne une potentialisation de l'exocytose. [5]

Essai kinase PI3K

Des liposomes de phospholipides contenant du phosphatidylinositol-(4,5)-bisphosphate (PIP2) sont préparés. Brièvement, du PIP2 bovin et de la phosphatidylsérine (rapport molaire 1:2) sont séchés sous vide et remis en suspension à 1 mM de PIP2 dans 20 mM de HEPES-KOH, pH 7,4, 50 mM de NaCl et 5 mM d'EDTA. La suspension lipidique est soumise à une brève sonication, suivie de 5 cycles de congélation-décongélation, puis de 20 cycles d'extrusion pour produire les liposomes. Le test est effectué dans des volumes de réaction de 60 µL dans un tampon 20 mM HEPES, pH 7,4, contenant 1 nM de PI3K, 1 µM de PIP2, 200 µM d'ATP, 1 µCi de [γ-³²P]ATP, 5 mM de MgCl₂, plus 50 µg/mL d'IgG de cheval comme protéine porteuse. La réaction est incubée pendant 10 min à température ambiante, stoppée dans 140 de 1 M K₂PO₄, 30 mM EDTA, pH 8,0, capturée sur une plaque filtrante en difluorure de polyvinylidène à 96 puits et lavée cinq fois avec 1 M K₂PO₄. Le filtre est laissé sécher complètement et la radioactivité liée est quantifiée. Les dilutions de IC-87114 sont testées à une concentration finale de 1% (p/p) de DMSO.

Chez la souris, IC-87114 (15 mg/kg–60 mg/kg) inhibe la réponse allergique au niveau de la peau du dos et de l'oreille. [3]Chez les souris induites avec l'anti-CD3 ou la ConA, IC-87114 (30 mg/kg) réduit les réponses d'hypersensibilité et diminue les taux plasmatiques de cytokines, telles que l'IL-2, l'IL-4, l'IL-17, l'IFN-γ et le facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α). [4]