AG-18 EGFR Inhibiteur

AG 18 inhibe EGFR et IR avec des K_i de 11 μM et 12 mM. AG 18 inhibe l'autophosphorylation de l'EGFR induite par l'EGF avec une IC50 de 15 μM dans les cellules A431. [1] AG 18 (10 μM) inhibe la prolifération des cellules GH3 induite par l'EGF. AG 18 (10 μM) provoque une inhibition significative de la prolifération cellulaire induite par 10 nM et 1 μM de ghréline. AG 18 (10 μM) bloque l'augmentation de la phosphorylation d'ERK 1/2 stimulée par la ghréline dans les cellules GH3. [2]AG 18 inhibe la libération de [3H]taurine sensible au volume dans les cultures d'astrocytes primaires de manière dose-dépendante. AG 18 active la libération de D-[3H]aspartate dépendante du volume et induite par le gonflement à partir de cultures d'astrocytes primaires. [3] AG 18 (300 μM) inhibe la stimulation de l'expression d'ICAM-1 induite par le TPA de manière dose-dépendante dans les cellules épithéliales A549. AG 18 (300 μM) inhibe également la liaison ADN-protéine de NF-kappaB stimulée par le TPA et l'activité promotrice d'ICAM-1 dans les cellules épithéliales A549. AG 18 (300 μM) inhibe la liaison ADN-protéine de NF-kappaB induite par le TNF-alpha et l'activité promotrice d'ICAM-1 de manière dose-dépendante dans les cellules épithéliales A549. L'activité IKK est stimulée à la fois par le TNF-alpha et le TPA, et ces effets sont inhibés par AG 18 (100 μM) dans les cellules épithéliales A549. [4] AG 18 (10 μM) diminue la puissance du 5-HT de 4 fois et réduit la contraction maximale du 5-HT dans l'artère carotide. AG 18 (10 μM) décale la contraction induite par le KCl de 2 fois et provoque l'inhibition maximale significative. [5]

Autophosphorylation du récepteur d'EGF

Le récepteur d'EGF purifié par WGA à partir de cellules A431 (0,5 μg/essai) est activé avec l'EGF (800 nM) pendant 20 min à 4 °C. La réaction est initiée par l'addition de Mg(Ac)₂ (60 mM), de tampon Tris-Mes, pH 7,6 (50 mM), et de [³²P]ATP (20 pM, 5 μCi/essai). La réaction est menée soit à 4 °C, soit à 15 °C et terminée par l'addition de tampon d'échantillon de dodécylsulfate de sodium (SDS) (10 % de glycérol, 50 mM Tris, pH 6,8, 5 % de β-mercaptoéthanol et 3 % de SDS). Les échantillons sont soumis à une électrophorèse sur gel de polyacrylamide à 8 % de SDS (SDS-PAGE) (préparé à partir de 30 % d'acrylamide et 0,8 % de bis-(acrylamide) et contenant 0,375 M Tris, pH 8,8, 0,1 % de SDS, 0,05 % de TEMED et 0,46 % de persulfate d'ammonium). Le gel est séché et une autoradiographie est réalisée avec un film radiographique Agfa Curix RP2. Les bandes radioactives pertinentes sont découpées et comptées en mode Cerenkov. La phase rapide d'autophosphorylation s'est poursuivie pendant encore 10 min. L'étendue de la phosphorylation achevée dans les 10 premières secondes à 15 °C représente 1/3 du signal total d'autophosphorylation et reflète probablement la phosphorylation du premier site sur le récepteur. L'intervalle de 10 secondes est donc choisi pour être utilisé dans les expériences d'autophosphorylation ultérieures.